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靶向Bcl2L12调控实验性自身免疫性葡萄膜炎来源抗原特异性Th17细胞功能的体外研究 认领 引用
1
作者 姜文婷 王加利 +4 位作者 杨宁 刘琳 杜蓓 魏瑞华 粘红 《眼科新进展》 CAS CSCD 北大核心 2026年第4期264-268,共5页
目的 探究Bcl2样蛋白12(Bcl2L12)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP1-20)特异性辅助性T细胞17(Th17)的影响。方法 将12只8~10周龄C57BL/6J雌鼠分为EAU组和正常对照组,每组6只。EAU组小... 目的 探究Bcl2样蛋白12(Bcl2L12)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP1-20)特异性辅助性T细胞17(Th17)的影响。方法 将12只8~10周龄C57BL/6J雌鼠分为EAU组和正常对照组,每组6只。EAU组小鼠腹腔注射百日咳毒素后,用IRBP1-20与完全弗氏佐剂乳化液注射足垫及背部皮下建立模型,对照组不接受免疫处理。免疫后13 d评估模型构建情况。分离EAU小鼠脾脏及淋巴结中的T细胞,实时荧光定量PCR检测Bcl2L12 mRNA表达水平。利用小鼠T细胞淋巴瘤细胞系(EL4)细胞筛选靶向Bcl2L12的有效小干扰RNA(siRNA),将筛选出的siBcl2L12或阴性对照(si-NC)转染至EAU小鼠CD4+T细胞,与经γ射线照射后的抗原呈递细胞共培养,加入白细胞介素(IL)-23诱导Th17极化。实时荧光定量PCR检测Th17相关基因[IL-17A、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、IL-1受体(IL-1R)、IL-23受体(IL-23R)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等]的mRNA表达量,ELISA检测细胞上清中IL-17水平,流式细胞仪检测Th17细胞比例。结果 免疫后13 d,EAU组小鼠眼底出现炎症改变,模型构建成功。与对照组相比,EAU组小鼠CD4+T细胞中Bcl2L12 mRNA表达显著上调(P<0.01)。EL4细胞验证结果显示,siBcl2L12-2敲低效率最高(P<0.01),用于后续实验。在共培养体系中,与Blank组和si-NC组相比,siBcl2L12组Th17细胞比例显著降低(P<0.05),上清中IL-17浓度显著下降(P<0.05),且IL-17A、RORγt、IL-1R、IL-23R、GM-CSF mRNA相对表达量均明显降低(均为P<0.01)。结论 敲低T细胞中的Bcl2L12可以抑制EAU小鼠IRBP1-20特异性Th17细胞的极化及相关炎症因子的表达,Bcl2L12对IRBP1-20特异性Th17细胞反应具有正向调控作用。 展开更多
关键词 免疫学 实验性自身免疫性葡萄膜炎 辅助性T细胞17 Bcl2样蛋白12
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富马酸二甲酯对Th17细胞体外分化调节作用的研究 认领 引用
2
作者 沈明灿 王颖 +1 位作者 魏瑞华 粘红 《天津医科大学学报》 2025年第1期25-29,35,共5页
目的:探讨富马酸二甲酯(DMF)对小鼠体外诱导分化的辅助性T细胞17(Th17)的抑制作用。方法:从C57BL/6J小鼠全身淋巴结和脾脏中获取淋巴细胞,采用免疫磁珠技术分选出Na?ve CD4+T细胞,在细胞因子作用下定向诱导分化为Th17细胞,建立Th17细胞... 目的:探讨富马酸二甲酯(DMF)对小鼠体外诱导分化的辅助性T细胞17(Th17)的抑制作用。方法:从C57BL/6J小鼠全身淋巴结和脾脏中获取淋巴细胞,采用免疫磁珠技术分选出Na?ve CD4+T细胞,在细胞因子作用下定向诱导分化为Th17细胞,建立Th17细胞体外诱导分化模型。实验分组设置为:对照组、5μmol/L DMF组、15μmol/L DMF组、25μmol/L DMF组。流式细胞术检测各组中Th17细胞的比率,qRT-PCR检测各组视黄酸受体相关孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-23受体(IL-23R)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、γ-干扰素(IFN-γ)、T辅助细胞分化转录因子(T-bet)和叉头框蛋白P3(FOXP3)m RNA的相对表达量,ELISA法检测各组IL-17A的蛋白表达量。结果:CD4+T细胞阳性分选率约为93%;流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,DMF处理后Th17细胞比率显著降低,25μmol/L DMF组抑制作用最显著(t=5.227,P0.05);ELISA法检测结果显示,与对照组相比,25μmol/L DMF组的IL-17A浓度显著降低(t=4.786,P<0.01)。结论:DMF可能通过抑制RORγt与IL-17A、IL-23R、GM-CSF、IFN-γ的表达,进而抑制Na?ve CD4+T细胞向Th17细胞分化的能力与Th17细胞的致病功能。 展开更多
关键词 富马酸二甲酯 辅助性T细胞17 分化 RORγt IL-23R
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人脐带间充质干细胞来源外泌体对兔自身免疫性干眼外周血巨噬细胞的调控 认领 引用 被引量：15
3
作者 李娜 粘红 +3 位作者 赵璐 韦燕凯 吴怡媛 魏瑞华 《中华实验眼科杂志（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期854-862,共9页
目的探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(hUC-MSC-exo)对兔自身免疫性干眼外周血单核巨噬细胞表型以及相关细胞因子表达的影响。方法分离培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)并鉴定,使用超速离心法分离纯化外泌体,透射电子显微镜下观察外... 目的探讨人脐带间充质干细胞来源外泌体(hUC-MSC-exo)对兔自身免疫性干眼外周血单核巨噬细胞表型以及相关细胞因子表达的影响。方法分离培养人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)并鉴定,使用超速离心法分离纯化外泌体,透射电子显微镜下观察外泌体形态和直径分布范围,Western blot法检测表面特异性蛋白。应用随机数字表法将6只实验兔随机分为正常对照组和干眼模型组,每组3只。干眼模型组建立兔自身免疫性干眼模型,造模后8周收集泪腺组织,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞相关基因mRNA的表达。在体外,将hUC-MSC-exo或者等容积的磷酸盐缓冲液(PBS)与经兔泪腺上皮细胞刺激后的干眼模型组外周血单个核细胞(PBMCs)共培养,实验分为PBS对照组和hUC-MSC-exo组,48 h后收集PBMCs,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞表型分子及相关细胞因子mRNA的表达。结果hUC-MSCs具有MSCs的免疫表型和基本生物学特性。透射电子显微镜下观察可见hUC-MSC-exo为直径30~100 nm的膜性小囊泡,其可表达特异性蛋白CD9、CD63和CD81。干眼模型组泪腺组织中,M1型巨噬细胞表型分子一氧化氮合酶2(NOS2)mRNA以及炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA相对表达量分别为3.06±1.00、2.77±0.72和1.30±0.08,较正常对照组的1.00±0.03、1.01±0.02和1.01±0.01明显升高,M2型巨噬细胞表型分子精氨酸酶1(Arg1)、CD206 mRNA以及抗炎因子IL-10 mRNA相对表达量分别为0.55±0.07、0.60±0.13和0.65±0.14,较正常对照组的1.00±0.00、1.00±0.00和1.01±0.01明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在体外,hUC-MSC-exo组PBMCs中M1型巨噬细胞表型分子NOS2 mRNA以及炎性因子TNF-α、IL-1βmRNA相对表达量分别为0.59±0.08、0.56±0.07和0.47±0.04,较PBS对照组的0.98±0.03、1.03±0.11和1.00±0.08明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);M2型巨噬细胞表型分子Arg1、CD206 mRNA以及抗炎因子TGF-β、IL-10、IL-4 mRNA相对表达量分别为2.13±0.28、1.32±0.03、1.53±0.20、1.47±0.08和1.51±0.16,较PBS对照组的1.10±0.17、1.01±0.06、1.05±0.10、0.98±0.03和1.01±0.03明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论hUC-MSC-exo可诱导兔自身免疫性干眼外周血单核巨噬细胞向抗炎性M2表型极化,抑制巨噬细胞相关炎性因子TNF-α、IL-1β分泌,同时升高抗炎因子IL-10和TGF-β表达,具有抑制炎症反应的潜能。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 外泌体 巨噬细胞 细胞因子 自身免疫性干眼
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兔自身免疫性干眼模型的建立及泪腺炎症因子研究 认领 引用 被引量：9
4
作者 杨丽媛 边领斋 +3 位作者 李雪 粘红 东莉洁 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第9期810-815,共6页
目的通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血... 目的通过静脉回输自体激活的淋巴细胞建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,并分析干眼的泪腺炎性因子,探究干眼的泪腺免疫反应。方法通过体外分离、培养兔泪腺上皮细胞和自体外周血淋巴细胞,建立二者的共培养体系。将体外激活的自体外周血淋巴细胞通过耳缘静脉注射的方法诱发自身免疫性泪腺炎。对干眼临床指标及泪腺细胞因子表达进行检测。结果与正常对照组相比,干眼模型组泪液分泌显著减少(t=115.6,P<0.05),泪膜破裂时间缩短(t=92.5,P<0.05)。荧光素钠染色显示角膜弥漫性点状着色,正常对照组基本无着色。泪腺组织HE染色显示淋巴细胞浸润,正常对照组很少。RT-PCR结果显示,干眼模型组泪腺中炎性因子IFN-γ、IL-6、IL-17 mRNA相对表达量显著升高(t=26.2、18.7、8.4;均为P<0.05),抑炎因子IL-10、TGF-βmRNA相对表达量显著降低(t=22.1、14.2;均为P<0.05)。结论经兔泪腺上皮细胞激活的自体外周血淋巴细胞静脉回输后,成功诱发干燥综合征样自身免疫泪腺炎,建立了稳定的兔自身免疫性干眼模型。泪腺组织中细胞因子IL-6、IL-17、IFN-γ、TGF-β、IL-10参与泪腺内炎症反应的发生和发展。 展开更多
关键词 自身免疫性泪腺炎 兔自身免疫性干眼模型 细胞因子 IL-10
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大鼠复发性实验性自身免疫性葡萄膜炎眼部炎症和病理特征分析 认领 引用 被引量：4
5
作者 郑慧 张晓敏 +4 位作者 粘红 张灵君 刘勋 Hui Shao 李筱荣 《中华实验眼科杂志（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期642-646,共5页
背景目前用于自身免疫性葡萄膜炎的实验研究动物模型多为单次发作性葡萄膜炎，与临床上自身免疫性葡萄膜炎患者反复发作导致的眼部严重组织形态学和功能学改变的自然病程并不完全相符。建立复发性实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型... 背景目前用于自身免疫性葡萄膜炎的实验研究动物模型多为单次发作性葡萄膜炎，与临床上自身免疫性葡萄膜炎患者反复发作导致的眼部严重组织形态学和功能学改变的自然病程并不完全相符。建立复发性实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型对临床研究具有重要意义。目的建立大鼠复发性EAU动物模型，动态观察眼部炎症和病理特点，并分析其眼部白细胞介素-17（IL-17）的表达。方法采用光感受器间维生素A类结合蛋白1177—1191多肽片段（IRBP1177—1191，R16）注射于9只SPF级Lewis大鼠皮下进行免疫，10d后分离淋巴结及脾脏T细胞，体外R16刺激下培养2d。将24只SPF级Lewis大鼠按随机数字表法分为正常组和造模后1、2、3个月组，每组6只。将制备的T细胞悬液通过尾静脉注射法注入模型组大鼠体内，建立复发性EAU模型。注射后每天在裂隙灯显微镜下观察大鼠眼部炎症表现，依据Caspi炎症反应分级标准进行评分。分别于造模后1、2、3个月处死动物后制备视网膜切片，并行苏木精-伊红染色，观察视网膜组织中炎性细胞浸润情况和视网膜厚度的改变；采用免疫组织化学法检测IL-17A在各组大鼠视网膜中的表达，并计算阳性表达的评分。结果R16特异性T细胞注射后第4天大鼠前房出现不同程度的混浊，炎症评分为2分。第6天前房重度混浊，评为3分；至第10天大鼠眼前节恢复正常，但造模后2个月内炎症复发4—5次，且大鼠一侧眼发病而对侧眼可正常，与人自身免疫性葡萄膜炎的自然病程极为相似。视网膜组织病理学检查发现，造模后1、2、3个月组随着注射时间的延长，炎性细胞浸润逐渐减少。与正常组大鼠比较，造模后1、2、3个月组大鼠视网膜全层、外核层及内核层逐渐变薄，4个组间的总体比较差异均有统计学意义（F=20．46、288．40、4．43，均P=0．00）；正常组及造模后1、2、3个月组大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）数分别为（231．27±15．36）、（225．36±17．79）、（132．18±9．39）和（67．45±11．90）个，显示造模后随着时间的延长，RGCs逐渐减少，差异有统计学意义（F=68．94，P=0．00）。正常组及造模后1、2、3个月组大鼠视网膜中IL-17表达评分分别为（0．64±0．17）、（1．92±0．19）、（1．17±0．23）和（0．83±0．23）分，显示造模后大鼠视网膜中IL-17表达明显增强，差异有统计学意义（F=64．10，P=0．00）。结论利用R16特异性T细胞可成功诱导大鼠的复发性EAU模型，Th17可能参与疾病的整个过程。 展开更多
关键词 葡萄膜炎 复发性,实验性 免疫 自身 动物模型 大鼠
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抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选 认领 引用 被引量：1
6
作者 粘红 安利国 +3 位作者 赵岩 陈吉中 范国才 王清明 《现代免疫学》 CAS 北大核心 2004年第5期357-361,共5页
构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连... 构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征 。 展开更多
关键词 肝癌细胞 单链抗体 scFv 噬菌体抗体库 筛选
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Sjgren综合征相关性干眼发病机制的研究进展 认领 引用 被引量：4
7
作者 魏瑞华 郝永娜 +3 位作者 边领斋 李雪 粘红 赵少贞 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第3期286-289,共4页
Sjgren综合征(Sjgren syndrome,SS)是一种主要累及外分泌腺、慢性炎症性的自身免疫性疾病,发病初期主要表现为泪液和唾液分泌减少所致的眼干、口干综合征,但在发病的晚期,会出现多系统损害的症状和体征。SS发病机制复杂,其确切发病... Sjgren综合征(Sjgren syndrome,SS)是一种主要累及外分泌腺、慢性炎症性的自身免疫性疾病,发病初期主要表现为泪液和唾液分泌减少所致的眼干、口干综合征,但在发病的晚期,会出现多系统损害的症状和体征。SS发病机制复杂,其确切发病机制国内外报道较少。目前,随着动物模型和实验检查技术的不断更新,关于SS发病机制的研究取得了新的进展,为早期诊断SS提供了新的理论证据。本文从遗传学、病理生理学方面就SS的发病机制做一综述,以期对SS相关性干眼的诊断和治疗有更新的认识。 展开更多
关键词 Sjogren综合征 干眼 发病机制
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近视儿童角膜生物力学参数与角膜高阶像差的相关性研究 认领 引用 被引量：3
8
作者 高智奇 刘珠珠 +4 位作者 刘桂华 荣华 李娜 魏瑞华 粘红 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2022年第9期1546-1549,共4页
目的:应用可视化角膜生物力学分析仪(Corvis ST)测量轻中度近视儿童的角膜生物力学参数与角膜高阶像差(HOAs)的相关性。方法:横断面研究。连续收集2021-04/07在天津医科大学眼科医院视光中心就诊的儿童近视患者255例的病例资料,均取右... 目的:应用可视化角膜生物力学分析仪(Corvis ST)测量轻中度近视儿童的角膜生物力学参数与角膜高阶像差(HOAs)的相关性。方法:横断面研究。连续收集2021-04/07在天津医科大学眼科医院视光中心就诊的儿童近视患者255例的病例资料,均取右眼进行分析。应用Corvis ST测量角膜生物力学参数;应用Pentacam三维眼前节分析仪测量并计算角膜总高阶像差(RMSh)、三阶像差(RMS3)、四阶像差(RMS4)。结果:RMS3与第2次压平时间(A2T)呈正相关关系(r=0.175,P=0.009),与眼轴长度(AL)呈负相关关系(r=-0.155,P=0.014);RMS4与最大压陷时反向曲率半径(HCR)呈负相关关系(r=-0.165,P=0.009);RMSh与HCR、AL呈负相关关系(r=-0.152,P=0.037;r=-0.175,P=0.005)。结论:近视儿童角膜生物力学参数与角膜高阶像差间存在相关性,硬度较高、抗变形能力较强的角膜,RMS3、RMS4、RMSh较小。 展开更多
关键词 可视化角膜生物力学分析仪 近视 高阶像差 角膜生物力学
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间充质干细胞对兔自身免疫性干眼模型病理改变及细胞因子表达的影响 认领 引用 被引量：3
9
作者 王希莲 路晓晓 +3 位作者 杨丽媛 粘红 杨丹 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第8期714-718,共5页
目的建立兔自身免疫性干眼模型,观察间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗后兔自身免疫性干眼的组织病理学变化及泪腺组织中细胞因子表达的变化。方法取健康成年雌性新西兰白兔24只24眼,采用随机数学表法将兔分为正常对照组... 目的建立兔自身免疫性干眼模型,观察间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)治疗后兔自身免疫性干眼的组织病理学变化及泪腺组织中细胞因子表达的变化。方法取健康成年雌性新西兰白兔24只24眼,采用随机数学表法将兔分为正常对照组、干眼模型组和MSCs治疗组,每组各8只8眼。MSCs治疗6周后,观察兔眼组织病理学改变,实时荧光定量PCR检测泪腺组织中Th1、Th17细胞分化相关细胞因子mRNA相对表达量。流式细胞仪检测干眼模型组和MSCs治疗组兔泪腺组织和脾脏组织中调节性T细胞(CD4+Foxp3+细胞)占淋巴细胞的比例。结果 MSCs治疗6周后,取各组兔泪腺并行HE染色显示:正常对照组未见或仅见少量淋巴细胞浸润;干眼模型组泪腺内部分腺体细胞出现萎缩,腺管周围和小血管周围可见散在分布的淋巴细胞汇集区;与干眼模型组相比,MSCs治疗组泪腺内淋巴细胞浸润减轻,腺泡细胞形态较好。与干眼模型组比较,MSCs治疗组结膜组织中淋巴细胞浸润聚集显著减轻,上皮结构完整,变性和萎缩细胞较少见。MSCs治疗组泪腺组织中Th1特征性细胞因子IFN-γ以及转录因子T-bet mRNA表达水平较干眼模型组明显下降,差异均有统计学意义(均为P0.05);其转录因子RORrt mRNA的表达水平较干眼模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MSCs治疗组泪腺组织中炎症因子TNF-α表达较干眼模型组显著降低,而抑炎因子TGF-β的表达较干眼模型组显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。泪腺组织中干眼模型组调节性T细胞(CD4+Foxp3+细胞)占淋巴细胞的比例为10.0%,而MSCs治疗组中调节性T细胞占淋巴细胞的比例为27.8%,MSCs治疗组调节性T细胞较干眼模型组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs可以减轻自身免疫性干眼的组织病理学改变,对自身免疫性干眼具有一定的免疫调节及治疗作用,其免疫调控作用可能与调节抑炎因子和促炎因子平衡有关。 展开更多
关键词 间充质干细胞 兔自身免疫性干眼 组织病理学 细胞因子
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人脐带间充质干细胞对兔自身免疫性干眼的疗效研究 认领 引用 被引量：3
10
作者 王希莲 杨丽媛 +4 位作者 粘红 路晓晓 李雪 刘勋 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第1期19-23,共5页
目的通过建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)对自身免疫性干眼的作用并初步探讨其机制。方法体外分离、培养hUC-MSCs并对其进行鉴定;采用静脉回输自... 目的通过建立稳定的兔自身免疫性干眼模型,观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)对自身免疫性干眼的作用并初步探讨其机制。方法体外分离、培养hUC-MSCs并对其进行鉴定;采用静脉回输自体激活的淋巴细胞建立兔自身免疫性干眼模型,将兔分为正常对照组、干眼模型组和h UCMSCs治疗组,h UC-MSCs治疗组于回输淋巴细胞后输注1 mL 1×10~7个·mL-1hUCMSCs,连续输注5 d,对照组输注等体积的PBS。三组分别在术后2周、4周、6周检测泪液分泌量、泪膜破裂时间和角膜荧光素钠染色,6周后行组织病理学观察,并检测泪腺组织中细胞因子的表达水平。结果术后2周、4周、6周h UC-MSCs治疗组较干眼模型组泪液分泌量、泪膜破裂时间显著升高(均为P<0.05);角膜荧光素钠染色着色显著减轻,组织病理学观察泪腺组织淋巴细胞浸润较干眼模型组显著减少。hUC-MSCs治疗组和干眼模型组相比,泪腺组织中炎性因子IFN-γ、IL-17表达显著降低(F=50.48、18.13;均为P<0.05),而抑炎因子IL-10、TGF-β的表达显著升高(F=31.06、21.40;均为P<0.05)。结论h UC-MSCs减轻兔自身免疫性干眼,对其发挥免疫调控作用。 展开更多
关键词 间充质干细胞 兔自身免疫性干眼 细胞因子 白细胞介素-10
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两种光学生物测量仪在中国青少年人群中应用的比较 认领 引用 被引量：2
11
作者 韦燕凯 粘红 +1 位作者 谷天瀑 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第9期835-838,共4页
目的评估两种光学生物测量仪(Lenstar LS900~与SW-9000)对青少年眼球生物测量结果的重复性,并比较两种仪器测量值的一致性。方法采用前瞻性研究,纳入65例屈光不正患者,分别用SW-9000与Lenstar LS900~进行右眼眼球生物测量,应用单因... 目的评估两种光学生物测量仪(Lenstar LS900~与SW-9000)对青少年眼球生物测量结果的重复性,并比较两种仪器测量值的一致性。方法采用前瞻性研究,纳入65例屈光不正患者,分别用SW-9000与Lenstar LS900~进行右眼眼球生物测量,应用单因素方差分析评估仪器的可重复性,应用Bland-Altman散点图对两种仪器测量值进行一致性评价。结果Lenstar LS900~测量指标AL、K1、K2、CCT、AD、LT、PD的重复性良好,ICC均大于0.90;WTW略差,但仍大于0.88。SW-9000测量指标AL、K1、K2、CCT的重复性良好,ICC均大于0.9,其余参数重复性较差。将两种仪器重复性均良好的AL、K1、K2、CCT分别进行比较,发现SW-9000所测AL、CCT比Lenstar LS900~略长,且差异均有统计学意义(均为P0.05)。此外两种仪器间AL、K1、K2、CCT均存在密切的线性相关(均为r>0.97,均为P<0.01)。Bland-Altman散点图显示,两种仪器测量指标的95%Lo A分别为AL:-0.057~0.133 mm;K1:-0.456~0.369 D;K2:-0.388~0.549 D;CCT:-3.483~8.016μm。结论对于8~18岁青少年人群,Lenstar LS900~与SW-9000眼球生物测量指标(包括AL、K1、K2、CCT)均具有良好的重复性,SW-9000与Lenstar LS900~测量参数AL、K1、K2、CCT相关性高,且4个参数95%Lo A在临床上可接受,一致性良好。 展开更多
关键词 SW-9000 重复性 一致性 Lenstar LS900
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白细胞介素-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞的构建及其对自体外周血Th17细胞的免疫调控 认领 引用 被引量：1
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作者 赵璐 粘红 +4 位作者 韦燕凯 金成成 李娜 陈思思 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第12期1105-1110,共6页
目的探究白细胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用。方法构建IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-mod... 目的探究白细胞介素10(interleutin 10,IL-10)基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)对自体外周血Th17细胞的免疫调控作用。方法构建IL-10基因修饰的兔脂肪来源间充质干细胞(interleukin-10 gene-modified adipose mesenchymal stem cells,IL-10-ADSCs)及荧光蛋白标记的兔脂肪来源间充质干细胞(green fluorescent protein-adipose mesenchymal stem cells,GFP-ADSCs),定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,Q-PCR)及Western blot检测细胞IL-10基因及蛋白表达水平。分离培养兔泪腺上皮细胞及自体外周血淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)建立淋巴细胞体外激活共培养体系,分组按PBMCsADSCs为51的比例加入等量ADSCs、IL-10-ADSCs及GFP-ADSCs,同时以等比例的成人真皮成纤维细胞-α作为对照组,Q-PCR检测各组Th17细胞相关基因mRNA表达水平。结果成功构建IL-10-ADSCs和GFP-ADSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达率达80%以上。Q-PCR及Western blot检测结果显示,IL-10-ADSCs组IL-10 mRNA及蛋白表达水平均高于GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,ADSCs组、IL-10-ADSCs组及GFP-ADSCs组均可降低兔外周血Th17细胞相关细胞因子IL-17及转录因子维甲酸相关孤独受体C mRNA表达水平(均为P<0.05),且IL-10-ADSCs组降低效果显著高于ADSCs组及GFP-ADSCs组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 IL-10-ADSCs可抑制Th17细胞分化相关基因的表达水平,具有抑制Th17细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 IL-10基因 慢病毒 过表达 脂肪间充质干细胞 Th17细胞
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骨髓来源树突状细胞miR-338-3p对实验性自身免疫性葡萄膜炎Th17细胞活化的影响 认领 引用 被引量：1
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作者 杨超 韦燕凯 +1 位作者 魏瑞华 粘红 《中华实验眼科杂志（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期933-939,共7页
目的探讨骨髓来源树突状细胞(BMDCs)中微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性Th17细胞的调控。方法分离野生型C57BL/6小鼠股骨和胫骨,冲洗骨髓腔得到骨髓细... 目的探讨骨髓来源树突状细胞(BMDCs)中微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)光感受器细胞间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性Th17细胞的调控。方法分离野生型C57BL/6小鼠股骨和胫骨,冲洗骨髓腔得到骨髓细胞,利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4定向诱导分化为BMDCs。诱导培养第5天,将未成熟的BMDCs分为miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组,分别转染miR-338-3p拟似物和拟似物阴性对照。转染后24 h,加入100 ng/ml脂多糖刺激BMDCs成熟。采用实时荧光定量PCR检测BMDCs中miR-338-3p及IL-6、IL-23、IL-1βmRNA表达。采用IRBP 1-20、弗氏不完全佐剂(IFA)及结核分枝杆菌H37Ra主动免疫小鼠诱导EAU模型,免疫后第13天,分离EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞,分别将miR-338-3p拟似物转染组和拟似物阴性对照组BMDCs与T细胞在含有IRBP 1-20的培养基中共培养,Th17细胞条件诱导,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测共培养上清液中IL-17质量浓度;实时荧光定量PCR检测共培养细胞中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17 mRNA相对表达量;流式细胞仪检测共培养细胞中IL-17+细胞比率。此外,为进一步验证BMDCs中miR-338-3p对Th17细胞的调控作用,分别将miR-338-3p抑制剂或抑制剂阴性对照转染的BMDCs与EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞共培养,ELISA法检测共培养上清液中IL-17质量浓度。结果miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中miR-338-3p相对表达量较拟似物阴性对照组明显升高,差异有统计学意义(t=6.861,P=0.002)。miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中RORγt、IL-17 mRNA相对表达量分别为1.34±0.16和1.33±0.16,明显高于阴性对照组的1.00±0.01和1.00±0.01,差异均有统计学意义(t=3.632,P=0.022;t=3.681,P=0.021);ELISA检测结果显示,miR-338-3p拟似物转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(5941.00±452.40)pg/ml,明显高于拟似物阴性对照组的(4299.00±348.30)pg/ml,差异有统计学意义(t=4.979,P=0.008),miR-338-3p抑制剂转染组共培养上清液中IL-17质量浓度为(3092.00±200.90)pg/ml,明显低于抑制剂阴性对照组的(4063.00±131.50)pg/ml,差异有统计学意义(t=7.005,P=0.002);流式细胞仪检测结果显示,miR-338-3p拟似物转染组共培养细胞中IL-17+细胞比例为(8.03±1.35)%,明显高于拟似物阴性对照组的(4.52±0.73)%,差异有统计学意义(t=3.968,P=0.017)。miR-338-3p拟似物转染组BMDCs中IL-6、IL-23和IL-1βmRNA相对表达量分别为2.23±0.21、2.21±0.56和2.32±0.43,明显高于拟似物阴性对照组的1.00±0.06、1.00±0.07和1.01±0.15,差异均有统计学意义(t=10.290,P=0.001;t=3.747,P=0.020;t=5.280,P=0.006)。结论miR-338-3p过表达可以增强BMDCs中Th17细胞极化相关因子IL-6、IL-23和IL-1β的表达,促进IRBP 1-20特异性Th17细胞活化。 展开更多
关键词 辅助性T细胞17,免疫 实验性自身免疫性葡萄膜炎 微小RNA 338-3p 骨髓来源树突状细胞
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间充质干细胞对自身免疫性干眼的免疫调控作用研究进展 认领 引用 被引量：1
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作者 王希莲 路晓晓 +2 位作者 杨丽媛 粘红 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第5期480-483,共4页
间充质干细胞(mesonchymal stem cells,MSCs)具有良好的免疫调节功能,可以抑制多种免疫细胞群增殖,直接作用抑制T淋巴细胞的活化增殖,上调Treg细胞或通过分泌可溶性因子调节Th1/Th2反应平衡而发挥免疫调节作用,通过抗炎、调控各类性细... 间充质干细胞(mesonchymal stem cells,MSCs)具有良好的免疫调节功能,可以抑制多种免疫细胞群增殖,直接作用抑制T淋巴细胞的活化增殖,上调Treg细胞或通过分泌可溶性因子调节Th1/Th2反应平衡而发挥免疫调节作用,通过抗炎、调控各类性细胞因子的表达等方面抑制炎性因子的分泌同时促进抑炎因子分泌,降低基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9等可能促进泪腺组织损害因子的表达水平,进而发挥其免疫调节作用,MSCs能减轻自身免疫性干眼的临床指标,恢复部分泪腺组织的分泌功能,本文就MSCs对自身免疫性干眼免疫调控的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 间充质干细胞 自身免疫性干眼 免疫调节
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负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物在兔角膜移植中的研究 认领 引用
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作者 李雪 王海燕 +6 位作者 郝永娜 赵少贞 刘文广 李亚楠 边领斋 粘红 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第2期108-113,共6页
目的观察负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物,在行板层角膜移植术后角膜的愈合情况,评价其作为角膜移植替代物的可行性。方法选用健康成年大耳白兔105只,随机分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组各30只,Ⅰ组、Ⅱ组分别行板层植入胶... 目的观察负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物,在行板层角膜移植术后角膜的愈合情况,评价其作为角膜移植替代物的可行性。方法选用健康成年大耳白兔105只,随机分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,每组各30只,Ⅰ组、Ⅱ组分别行板层植入胶原基复合角膜替代物、负载可递送内皮抑制素基因的胶原基复合角膜替代物;Ⅲ组为同种异体对照组。各组根据不同处死时间随机分为3 d、7 d、15 d、1个月、3个月、6个月组,每组各5只。其余15只(30眼)作为Ⅲ组角膜移植供体来源。术后行裂隙灯显微镜观察角膜透明度与角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)评分情况,行HE染色以及上皮细胞标志蛋白K3和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的免疫组织化学检测。采用Friedman秩和检验行组间比较,组内两两比较采用Wilcoxon符号秩和检验。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术后角膜透明度逐渐升高(P1=0.000、P2=0.000、P3=0.006)。术后3 d、7 d、3个月,Ⅰ组和Ⅲ组角膜透明度评分差异均有统计学意义(P=0.000、0.000、0.022);术后7 d,Ⅰ组和Ⅱ组角膜透明度评分差异有统计学意义(P=0.037)。术后三组角膜CNV评分随时间延长逐渐升高,至术后15 d达最高,后逐渐降低(P1=0.001、P2=0.001、P3=0.000)。术后3 d、7 d、15 d,Ⅰ组和Ⅲ组CNV评分差异有统计学意义(P=0.041、0.000、0.024);术后7 d,Ⅰ组和Ⅱ组CNV评分差异有统计学意义(P=0.011)。组织学观察结果显示:Ⅰ组、Ⅱ组术后1个月移植材料几乎完全降解,角膜基质胶原排列趋于规则,Ⅲ组胶原纤维排列局部欠规则;术后6个月三组胶原纤维排列基本规则。免疫组织化学检测结果显示:术后6个月,三组角膜上皮细胞特异性标志蛋白K3阳性表达。术后6个月VEGF表达较术后15 d减少,Ⅲ组较Ⅰ组、Ⅱ组表达减少。结论胶原基复合角膜替代物能支持角膜上皮的生长,促进角膜基质的改建,抑制CNV生成,进一步改进后有望成为新型的板层角膜移植支架材料。 展开更多
关键词 角膜移植 兔 伤口愈合 支架材料
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TLR7激动剂CL097对实验性自身免疫性葡萄膜炎中Th17细胞活性的促进作用 认领 引用 被引量：3
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作者 陈琳 粘红 +5 位作者 魏瑞华 张红梅 张晓敏 肖青 李雪 李筱荣 《中华实验眼科杂志（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期294-299,共6页
背景 研究表明,Toll样受体7（TLR7）在自身免疫性疾病中发挥重要作用,但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中是否通过树突状细胞（DCs）调控辅助性T淋巴细胞17（Th17）的作用机制鲜见报道.目的 探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓... 背景 研究表明,Toll样受体7（TLR7）在自身免疫性疾病中发挥重要作用,但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中是否通过树突状细胞（DCs）调控辅助性T淋巴细胞17（Th17）的作用机制鲜见报道.目的 探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs）对光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP） 1-20-特异性Th17细胞的影响.方法 采用C57BL/6小鼠股骨和胫骨分离小鼠骨髓细胞,将重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）及重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）加入培养基在体外定向诱导BMDCs,于诱导后第6天在培养基中加入5μg/ml CL097作用8h,对照组加入PBS,采用实时荧光定量PCR技术检测CL097处理组与对照组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及转化生长因子-β（TGF-β） mRNA的相对表达量.小鼠腹腔内注射百日咳毒素1μg,注射后2h将IRBP1-20与等容积含有结核分枝杆菌HR37RA的完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫C57BL/6小鼠,眼底检查参照Caspi 0 ～4分的标准进行炎症评分.免疫后第13天取眼球制作病理切片,苏木精-伊红染色后行组织病理学检查,并分离小鼠脾脏及淋巴结中IRBP1.20-特异性T细胞,分别与CL097处理组及对照组的BMDCs共培养5d,收集细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测2个组细胞中IL-17、γ干扰素（IFN-γ）、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）和T细胞中表达的T盒21转录因子（T-bet） mRNA的相对表达量;采用流式细胞仪检测并分析CL097处理组和对照组Th1与Th17细胞比例的变化.结果 EAU模型成功建立.实时荧光定量PCR检测结果显示,CL097处理组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003）,而TGF-β mRNA相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义（t=10.410,P=0.009）.CL097处理组BMDCs与IRBP1-20-特异性T细胞共培养后,RORγt和IL-17 mRNA相对表达量较对照组明显升高,差异均有统计学意义（t=8.844,P=0.012;t=8.831,P=0.013）,而CL097处理组中T-bet、IFN-γmRNA的相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义（t=2.078,P=0.173; t=1.082,P=0.393）.流式细胞仪检测证实,CL097处理组Th17细胞的百分比为（17.750±4.793）％,明显高于对照组的（10.240±3.173）％,差异有统计学意义（t=4.938,P=0.039）,CL097处理组和对照组Th1细胞的百分比分别为（1.123±0.356）％和（1.060±0.384）％,差异无统计学意义（t=2.714,P=0.113）.结论 TLR7激动剂CL097促进BMDCs分泌与Th17细胞极化相关的细胞因子,并促进IRBP1-20-特异性Th17细胞的分化. 展开更多
关键词 Toll样受体7/激动剂,CL097 葡萄膜炎/免疫性 CD4+T淋巴细胞/分泌 辅助性T细胞17 细胞极性/免疫 炎性因子 树突状细胞/骨髓源性 C57BL/6小鼠
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停戴角膜塑形镜期间角膜前表面形态恢复情况观察 认领 引用 被引量：5
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作者 周佳 林伟平 +4 位作者 刘桂华 李颖 厉娜 粘红 魏瑞华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第8期739-742,共4页
目的观察不同屈光度患者配戴角膜塑形镜2 a后停戴不同时间角膜前表面形态的恢复情况。方法收集2012年10月至2014年10月在天津医科大学眼科医院近视防控门诊就诊且配戴角膜塑形镜2 a的8~14岁近视患者60例(60只右眼)进行自身对照研究。根... 目的观察不同屈光度患者配戴角膜塑形镜2 a后停戴不同时间角膜前表面形态的恢复情况。方法收集2012年10月至2014年10月在天津医科大学眼科医院近视防控门诊就诊且配戴角膜塑形镜2 a的8~14岁近视患者60例(60只右眼)进行自身对照研究。根据近视度数分为A组(等效球镜度数≤-2.00 D)、B组(等效球镜度数为>-2.00^-4.00 D)、C组(等效球镜度数为>-4.00^-6.00 D),分别在停戴角膜塑形镜1周、2周、1个月观察患者角膜前表面形态,包括平K值(FK值)、陡K值(SK值)和平均K值的恢复情况,同时观察眼轴长度以及中央角膜厚度的变化。结果A组角膜FK值、SK值、平均K值在停戴2周后与戴镜前相比差异均无统计学意义(均为P>0.05);B组角膜FK值、SK值、平均K值在停戴1个月后基本恢复至戴镜前水平;C组停戴1个月后FK值、SK值、平均K值与戴镜前相比,差异仍均有统计学意义(均为P0.05)。B组与C组的眼轴长度,停戴2周与停戴1周相比差异均有统计学意义(均为P0.05);停戴1个月后,A组、B组、C组眼轴长度较戴镜前分别增长了(0.43±0.36)mm、(0.35±0.21)mm和(0.36±0.29)mm。结论不同屈光度停戴后角膜参数恢复到戴镜前水平所需时间不同;短时间停戴未见眼轴长度明显增长。 展开更多
关键词 角膜塑形镜 角膜曲率 角膜厚度 眼轴长度
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miR-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼外周血Th17细胞的免疫调控作用 认领 引用 被引量：3
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作者 高敏 赵璐 +2 位作者 陈思思 魏瑞华 粘红 《中华实验眼科杂志（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期716-723,共8页
目的探讨慢病毒介导微小RNA(miR)-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼模型外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用。方法构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装miR-31-5p过表达及其对照慢病毒,进行浓缩和滴度测定。建立兔自身免疫性干眼模型... 目的探讨慢病毒介导微小RNA(miR)-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼模型外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用。方法构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装miR-31-5p过表达及其对照慢病毒,进行浓缩和滴度测定。建立兔自身免疫性干眼模型,并分离模型兔外周血单个核细胞(PBMC),分别感染miR-31-5p及阴性对照慢病毒颗粒作为miR-31-5p过表达组和对照组,采用实时荧光定量PCR法检测miR-31-5p的表达水平。将2个组PBMC与经γ射线照射后的泪腺上皮细胞共培养,采用实时荧光定量PCR法检测2个组PBMC中Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)、标志性细胞因子白细胞介素-17(IL-17)及Th17细胞极化相关细胞因子IL-1β、IL-6和IL-23的mRNA表达水平;采用Western blot法检测PBMC中IL-17的蛋白表达水平。结果通过测序验证,成功构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装并浓缩miR-31-5p过表达和对照慢病毒颗粒,滴度测定结果分别为3.82×107 TU/ml和3.50×107 TU/ml,满足后续实验需求。实时荧光定量PCR结果显示,miR-31-5p过表达组miR-31-5p相对表达量较对照组显著升高,差异有统计学意义(t=-9.696,P<0.001)。在兔泪腺上皮细胞与PBMC共培养体系中,miR-31-5p过表达组PBMC中的RORC、IL-17 mRNA相对表达量分别为0.33±0.03和0.28±0.09,明显低于对照组的1.00±0.00和1.00±0.00,差异均有统计学意义(t=46.256、13.810,均P<0.05)。Western blot检测结果显示,miR-31-5p过表达组PBMC中IL-17蛋白相对表达量较对照组明显降低,差异有统计学意义(t=4.977,P=0.008)。实时荧光定量PCR结果显示,miR-31-5p过表达组PBMC中IL-6、IL-23和IL-1βmRNA相对表达量较对照组显著下降,差异均有统计学意义(t=220.076、6.641、13.271,均P<0.05)。结论miR-31-5p过表达可能通过下调免疫微环境中IL-6、IL-23、IL-1β等细胞因子的表达负向调控Th17细胞免疫反应。 展开更多
关键词 干眼 干燥综合征 Th17细胞 miR-31-5p 动物模型 外周血单个核细胞
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c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠模型Th17细胞比例及细胞因子表达的影响 认领 引用 被引量：2
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作者 刘玉玲 赵璐 +3 位作者 杨超 陈思思 魏瑞华 粘红 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2023年第6期429-433,共5页
目的探讨c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠模型光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性辅助性T细胞17(Th17)细胞比例及细胞因子表达的影响。方法取健康C57BL/6J小鼠(8~10周龄)6只,采用随机数字表法... 目的探讨c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠模型光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP 1-20)特异性辅助性T细胞17(Th17)细胞比例及细胞因子表达的影响。方法取健康C57BL/6J小鼠(8~10周龄)6只,采用随机数字表法将小鼠分为正常对照组、EAU组,每组3只。EAU组小鼠腹腔内注射350 ng百日咳毒素,单后足和脊柱两侧皮下注射含150μg IRBP 1-20、0.8 mg结核分枝杆菌H37RA和弗氏不完全佐剂的乳化剂以诱导EAU模型;正常对照组小鼠不给予特殊干预。免疫后13 d,行间接检眼镜检查并通过小动物视网膜成像系统可视化检测小鼠眼底炎性病灶,HE染色观察视网膜组织病理学改变,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测T细胞和眼球组织中c-Myc mRNA的表达。将EAU模型小鼠T细胞分为对照组和10058-F4组,10058-F4组T细胞加入50μmol·L-110058-F4,对照组T细胞不给予药物干预。培养6 h后,洗去药物,将两组T细胞与IRBP 1-20(10 mg·L-1)及骨髓来源树突细胞共培养,同时加入20μg·L-1白细胞介素(IL)-23(Th17细胞诱导条件)。采用qRT-PCR检测c-Myc、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17A、IL-17F和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA相对表达量,ELISA检测共培养细胞上清液中IL-17含量,流式细胞仪检测共培养细胞中Th17细胞比例。结果本研究EAU组小鼠模型建立成功。qRT-PCR检测结果显示,EAU组小鼠T细胞、眼球组织中c-Myc mRNA相对表达量分别为1.85±0.37、2.31±0.47,较正常对照组(1.01±0.02、0.99±0.05)均明显升高,差异均有统计学意义(P=0.017、0.008);10058-F4组T细胞c-Myc mRNA相对表达量为0.57±0.03,明显低于对照组(1.04±0.02),差异有统计学意义(P<0.001)。ELISA检测结果显示,10058-F4组共培养细胞上清液中IL-17含量明显低于对照组,差异有统计学意义(P=0.025)。流式细胞仪检测结果显示,10058-F4组共培养细胞中Th17细胞比例为(17.97±0.91)%,明显低于对照组[(22.50±0.90)%],差异有统计学意义(P=0.004)。qRT-PCR检测结果显示,10058-F4组T细胞RORγt、IL-17A、IL-17F、GM-CSF mRNA相对表达量分别为0.52±0.11、0.51±0.06、0.58±0.15、0.75±0.03,明显低于对照组(1.01±0.01、1.00±0.01、1.02±0.02、1.01±0.02),差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论c-Myc抑制剂10058-F4可显著降低T细胞中c-Myc表达水平,抑制Th17细胞特异性转录因子RORγt表达及效应细胞因子IL-17A、IL-17F、GM-CSF的产生,负向调控IRBP 1-20特异性Th17细胞免疫反应。 展开更多
关键词 辅助性T细胞17 实验性自身免疫性葡萄膜炎 c-Myc抑制剂 10058-F4
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lncRNA 5033413D16Rik对实验性自身免疫性葡萄膜炎Th17细胞活性的抑制作用 认领 引用 被引量：1
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作者 李学佳 张开朗 +2 位作者 陈思思 魏瑞华 粘红 《中华实验眼科杂志（中英文）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期983-990,共8页
目的探讨长链非编码RNA 5033413D16Rik(lncRNA 5033413D16Rik)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP1-20)特异性辅助性T17(Th17)细胞活性的影响。方法选取SPF级8~10周龄C57BL/6雌性小鼠12只,采用... 目的探讨长链非编码RNA 5033413D16Rik(lncRNA 5033413D16Rik)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP1-20)特异性辅助性T17(Th17)细胞活性的影响。方法选取SPF级8~10周龄C57BL/6雌性小鼠12只,采用随机数字表法分为EAU组和正常对照组,每组各6只。正常对照组小鼠不接受任何处理,将IRBP1-20和完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫EAU组小鼠。免疫后13 d,行眼底检查并进行炎症评分,苏木精-伊红染色观察视网膜组织病理学改变;分离EAU小鼠脾脏及淋巴结中T细胞,实时荧光定量PCR检测lncRNA 5033413D16Rik相对表达量。将分离培养的T细胞分为短发夹RNA(shRNA)-5033413D16Rik转染组和shRNA-阴性对照(NC)转染组,分别转染相应shRNA,实时荧光定量PCR验证shRNA-5033413D16Ri的敲低效率。将2个组细胞分别与骨髓源性树突状细胞在Th17极化条件下共培养,实时荧光定量PCR检测2个组共培养细胞中转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17(IL-17)、IL-23受体(IL-23R)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA相对表达量;ELISA试剂盒检测2个组共培养细胞上清中IL-17质量浓度;流式细胞仪检测2个组共培养细胞中Th17细胞百分比。结果成功建立小鼠EAU模型。实时荧光定量PCR检测结果显示,与正常对照组相比,EAU组小鼠T细胞中lncRNA 5033413D16Rik相对表达量显著降低,差异有统计学意义(t=-13.332,P<0.001)。与shRNA-NC转染组相比,shRNA-5033413D16Rik转染组T细胞中lncRNA 5033413D16Rik相对表达量显著降低,差异有统计学意义(t=-6.338,P<0.01)。shRNA-5033413D16Rik转染组共培养细胞中RORγt、IL-17、IL-23R和GM-CSF mRNA相对表达量分别为1.61±0.13、1.51±0.13、1.85±0.33和1.45±0.11,明显高于shRNA-NC转染组的1.00±0.01、1.00±0.01、1.00±0.01和1.00±0.01,差异均有统计学意义(t=-6.839、-8.221、-4.538、-4.189,均P<0.05);ELISA检测结果显示,shRNA-5033413D16Rik转染组共培养细胞上清中IL-17质量浓度为(2350.39±367.02)pg/ml,明显高于shRNA-NC转染组的(1513.31±310.37)pg/ml,差异有统计学意义(t=-3.016,P=0.039);流式细胞仪检测结果显示,shRNA-5033413D16Rik转染组共培养细胞中Th17细胞比例为(17.20±0.44)%,明显高于shRNA-NC转染组的(14.10±0.84)%,差异有统计学意义(t=-3.264,P=0.031)。结论lncRNA 5033413D16Rik可以抑制抗原特异性Th17细胞致病性相关基因的表达,负向调控IRBP1-20特异性Th17细胞反应。 展开更多
关键词 葡萄膜炎 自身免疫性疾病 实验性自身免疫性葡萄膜炎 辅助性T17细胞 lncRNA 5033413D16Rik
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