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GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白 认领 引用 被引量：2
1
作者 周鑫琦 王颖洁 +1 位作者 张文慧 张亚妮 《中国家禽》 北大核心 2020年第9期19-25,共7页
为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到31... 为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 NOS2 GST pull-down 质谱分析技术 蛋白质相互作用
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GST pull-down联合质谱技术鉴定与calponin-3相互作用的蛋白质 认领 引用 被引量：1
2
作者 游金 李艳萍 +4 位作者 王蒙 李游 马中琪 杨光铭 卢春花 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1368-1376,共9页
人(Homo sapiens)源calponin-3蛋白由CNN3基因编码,是一种与应激纤维相关肌动蛋白结合的蛋白质。研究表明其参与伤口愈合、细胞收缩、生物发育、细胞融合以及癌细胞侵袭转移等生物过程。鉴于calponin-3生物学功能的多样性,了解其在细胞... 人(Homo sapiens)源calponin-3蛋白由CNN3基因编码,是一种与应激纤维相关肌动蛋白结合的蛋白质。研究表明其参与伤口愈合、细胞收缩、生物发育、细胞融合以及癌细胞侵袭转移等生物过程。鉴于calponin-3生物学功能的多样性,了解其在细胞中的相互作用信息,将有助于深入探讨其执行生物功能的分子机制。本研究通过构建人源calponin-3的重组原核表达质粒pGEX-4T-CNN3,优化重组蛋白的原核表达诱导条件,获得GST-calponin-3融合蛋白。并通过GST pull-down实验“垂钓”人胚肾上皮细胞293t中直接或间接与calponin-3结合的靶蛋白。经由LC-MS/MS质谱分析,共鉴定到11个潜在的与calponin-3相互作用靶蛋白。进而对这些蛋白质进行GO(gene ontology)功能分析,发现其主要参与细胞黏附、催化活性、结构分子活性和翻译调控等生物过程。其中,靶蛋白Actin参与了阿尔茨海默病、钙黏着蛋白信号通路、Rho GTPase调节细胞骨架、亨廷顿病、趋化因子和细胞因子信号转导途径介导炎症以及Wnt信号通路等。这些结果表明calponin-3可能通过这些途径发挥重要生物学功能。因此,本研究从相互作用蛋白质的角度,为深入阐明calponin-3的生物学功能提供实验基础。 展开更多
关键词 calponin-3 原核表达 GST pull-down 液相色谱串联质谱
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GST pull-down结合质谱技术鉴定Muted蛋白相互作用蛋白 认领 引用
3
作者 郝振华 李巍 《医学分子生物学杂志》 CAS 2021年第6期409-414,共6页
目的鉴定Muted蛋白相互作用蛋白。方法表达并纯化GST-Muted蛋白融合蛋白,与小鼠脑组织蛋白共孵育,银染获得与Muted互作的蛋白条带,利用质谱技术获得这些条带的氨基酸序列,鉴定Muted的相互作用蛋白。结果初步鉴定出31个与Muted特异结合... 目的鉴定Muted蛋白相互作用蛋白。方法表达并纯化GST-Muted蛋白融合蛋白,与小鼠脑组织蛋白共孵育,银染获得与Muted互作的蛋白条带,利用质谱技术获得这些条带的氨基酸序列,鉴定Muted的相互作用蛋白。结果初步鉴定出31个与Muted特异结合的互作蛋白,包括外泌体蛋白、细胞骨架蛋白及马达蛋白等,进一步应用免疫共沉淀技术验证了Muted与Stxbp1的相互作用。结论从小鼠脑组织初步鉴定了Muted蛋白的结合蛋白,为进一步研究Muted蛋白在LDCVs形成和分泌过程中的功能及机制提供了新的线索。 展开更多
关键词 大致密核心颗粒 GST pull-down 质谱 Muted蛋白
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GST pull-down筛选冠突曲霉MAT的互作蛋白 认领 引用 被引量：3
4
作者 吴娟 徐宁 +3 位作者 张胜花 张小丹 刘缘圆 葛永怡 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期1-12,共12页
目的:冠突曲霉(Aspergillus cristatus)是一种同宗结合菌,它的产孢受渗透压调控,与构巢曲霉的光调控产孢机制存在较大差异。冠突曲霉的有性生殖主要受MAT1-1-1和MAT1-2-1调控,但MAT基因对该菌有性生殖的调控机制仍不清楚。期望筛选得到... 目的:冠突曲霉(Aspergillus cristatus)是一种同宗结合菌,它的产孢受渗透压调控,与构巢曲霉的光调控产孢机制存在较大差异。冠突曲霉的有性生殖主要受MAT1-1-1和MAT1-2-1调控,但MAT基因对该菌有性生殖的调控机制仍不清楚。期望筛选得到冠突曲霉MAT的互作蛋白,为深入研究冠突曲霉有性产孢机制奠定基础。方法:利用GST pull-down联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选可能与冠突曲霉MAT1-1-1和MAT1-2-1互作的蛋白,结合ProteinPilot和冠突曲霉基因组注释结果进行互作蛋白的注释及GO分析,其中互作蛋白SI65_00917和SI65_03348利用RT-qPCR探索它们与有性发育的联系,并利用酵母双杂交技术初步验证它们与MAT蛋白的互作关系。结果:成功构建了GST-MAT1-1-1、GST-MAT1-2-1表达载体,诱导表达纯化出目的诱饵蛋白,分别利用诱饵蛋白捕获冠突曲霉总蛋白中的互作蛋白,经分析、筛选共鉴定出与MAT1-1-1互作的蛋白56个,与MAT1-2-1互作的蛋白413个。GO分析表明,这些蛋白参与翻译调控、代谢过程、蛋白质转运及蛋白结合等生物学过程,具有核苷酸结合活性、催化活性、蛋白结合活性;RT-qPCR结果表明互作蛋白SI65_00917可能与有性发育相关。酵母双杂交结果表明,SI65_00917蛋白具有自激活作用,可能是转录因子;SI65_03348蛋白与MAT1-1-1、MAT1-2-1在酵母中均有互作。结论:MAT通过与其他蛋白直接或间接的相互作用调控其有性发育过程。 展开更多
关键词 冠突曲霉 MAT GST pull-down 互作蛋白
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利用GST pull-down联合质谱技术鉴定H7N9禽流感病毒PA-X的互作蛋白 认领 引用 被引量：1
5
作者 徐国双 姜童潇 +3 位作者 郭艺迪 段铭 张茂林 关振宏 《广东农业科学》 CAS 2022年第1期121-127,共7页
【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进... 【目的】为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白。【方法】构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白。利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析。【结果】经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质。通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程。对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位。【结论】利用GST pulldown联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒H7N9 PA-X GST pull-down 质谱 Hsp70-2 蛋白互作
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GST pull-down联合LC-MS/MS筛选柑橘抗溃疡病转录因子CsBZIP40的互作蛋白 认领 引用 被引量：4
6
作者 窦万福 祁静静 +7 位作者 胡安华 陈善春 彭爱红 许兰珍 雷天刚 姚利晓 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期2243-2255,共13页
【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论... 【目的】CsBZIP40是一个与溃疡病抗性相关的转录因子,本研究旨在筛选转录因子CsBZIP40在响应柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)侵染过程中的互作蛋白,对CsBZIP40的互作网络进行分析,为柑橘抗溃疡病的分子育种提供理论依据。【方法】采用GST pull-down技术筛选柑橘在溃疡病菌侵染过程中CsBZIP40的互作蛋白。首先,构建带有GST标签的CsBZIP40蛋白融合表达载体,经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达、纯化后获得GST-CsBZIP40融合蛋白作为诱饵蛋白;然后,将GST-CsBZIP40融合蛋白固定在谷胱甘肽亲和磁珠上,用固定在亲和磁珠的GST-CsBZIP40诱饵蛋白与接种溃疡病菌或LB培养基后柑橘叶片总蛋白进行孵育,与GST-CsBZIP40诱饵蛋白结合的蛋白复合物洗脱收集后进行SDS-PAGE凝胶电泳验证。将验证成功的样品洗脱液进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测,鉴定出未侵染和侵染状态下CsBZIP40的互作蛋白,将检测到的蛋白利用甜橙基因组数据库进行注释,筛选出在溃疡病菌侵染过程中与CsBZIP40特异结合的蛋白,并进行GO、KEGG和互作网络分析。【结果】过表达CsBZIP40的转基因植株表型正常,与对照植株无明显差异。过表达CsBZIP40的转基因植株溃疡病抗性评价中病斑面积、病情指数均显著小于野生型植株,分别为野生型的45%和54%。以该转基因植株为材料成功提取出侵染溃疡病菌后和未接种溃疡病菌状态下的柑橘叶片总蛋白。成功构建出GST-CsBZIP40诱饵蛋白表达载体,诱导表达纯化出GST-BZIP40诱饵蛋白。利用GST-CsBZIP40诱饵蛋白从侵染溃疡病菌后柑橘总蛋白和未接菌柑橘总蛋白中成功钓取蛋白,并用LC-MS/MS检测。经过比对、注释和筛选,在柑橘溃疡病菌侵染过程中与GST-BZIP40特异结合的蛋白有53个,这些蛋白参与多个分子功能和通路。在这53个蛋白中,有6个蛋白(Cs1g02310、Cs3g05280、Cs3g23950、Cs6g13880、Cs7g12130、orange1.1t04973)可能与植物抗病性密切相关。数据库中已经证明53个蛋白中44个与CsBZIP40有直接或间接的互作关系。【结论】溃疡病菌侵染过程中有53个蛋白与CsBZIP40互作,根据注释6个蛋白与植物抗病性密切相关,这些蛋白可能在提高柑橘生物胁迫抗逆性方面发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 柑橘 柑橘溃疡病 柑橘溃疡病菌 BZIP GST pull-down 互作蛋白
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GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用 认领 引用 被引量：1
7
作者 胡焱 段志强 +4 位作者 嵇辛勤 赵佳福 邓珊珊 李世静 熊建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期126-133,共8页
旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因... 旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基质蛋白 importinβ1蛋白 GSTpull-down 蛋白相互作用
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GST pull-down技术验证CIPK7蛋白激酶与CBL1蛋白的相互作用 认领 引用 被引量：3
8
作者 黄聪琳 丁硕 +1 位作者 姜华 安黎哲 《兰州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期828-832,共5页
采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组... 采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组质粒,经诱导表达及纯化获得了可溶性GSTCIPK7和CBL1-His融合蛋白,GST pull-down试验证实了CBL1能够与CIPK7结合.CIPK7蛋白与CBL1蛋白之间存在直接的相互作用,为进一步研究蛋白激酶CIPK7的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 CBL1蛋白 GST pull-down CIPK7蛋白 蛋白质相互作用
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GST pull-down验证流感病毒PB1-F2蛋白与热休克蛋白40的相互作用 认领 引用 被引量：3
9
作者 侯佩莉 关振宏 +2 位作者 张茂林 李影 段铭 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期202-207,共6页
为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建... 为体外验证流感病毒PB1-F2与热休克蛋白Hsp40相互作用,通过两个方向的GST pull-down试验验证PB1-F2与Hsp40的相互作用。构建GST-多肽融合蛋白原核表达载体pGEX-6P-1-PB1-F2和pGEX-6P-1-Hsp40,并在大肠杆菌(E.co-li)BL21中诱导表达;构建真核表达载体pLEGFP-Hsp40及pCAGGS-PB1-F2,并分别转染293T细胞使其表达Hsp40及PB1-F2融合蛋白,然后进行GST pull-down试验验证二者的相互作用。成功地构建了两种蛋白的各种表达载体,经表达、纯化获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白,GST pull-down试验正反两方向都证实了PB1-F2与Hsp40的相互作用,初步证实了流感病毒PB1-F2在体外能与Hsp40发生相互作用。 展开更多
关键词 GST pull-down 流感病毒PB1-F2蛋白 热休克蛋白40 蛋白质相互作用
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应用GST pull-down技术筛选番茄SIVQ6互作蛋白 认领 引用 被引量：4
10
作者 原贵波 莫双榕 +5 位作者 钱莹 臧栋楠 杨帆 蒋红亮 武媛 丁海东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期3146-3157,共12页
【目的】含有VQ基序(VQ)的蛋白质是植物特异性蛋白质,具有保守的“FxxhVQxhTG”氨基酸序列,调节植物生长和发育。番茄SlMPK1在高温胁迫过程中发挥重要作用,酵母双杂交(Y2H)显示SlVQ6蛋白能够与SlMPK1相互作用,通过GST pull-down技术进... 【目的】含有VQ基序(VQ)的蛋白质是植物特异性蛋白质,具有保守的“FxxhVQxhTG”氨基酸序列,调节植物生长和发育。番茄SlMPK1在高温胁迫过程中发挥重要作用,酵母双杂交(Y2H)显示SlVQ6蛋白能够与SlMPK1相互作用,通过GST pull-down技术进一步验证SlMPK1与SlVQ6的互作以及SlVQ6的互作网络,为研究SlVQ6介导的高温应答信号通路奠定基础。【方法】通过pGEX-4T-1-PC-VQ6质粒构建,以含有目的基因SIVQ6的菌液为模板,设计特异性引物,扩增目的基因序列,将获得的目的基因VQ6克隆到载体pGEX-4T-1的BamHⅠ和NotⅠ的酶切位点之间,将获得的重组质粒pGEX-4T-1-PC-VQ6转入TOP10克隆菌株经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达,通过GST柱亲和纯化获得目标蛋白PC-VQ6,进而获得预期GST-SlVQ6融合蛋白,通过体外磷酸化进一步确定SlVQ6是否是SlMPK1的下游底物;以GST-SlVQ6为诱饵蛋白固定于GST Sepharose Beads上,与番茄叶片总蛋白孵育后洗脱,收集洗脱液进行SDS-PAGE凝胶电泳验证,通过LC-MS/MS检测SlVQ6可能互作的候选蛋白,并对筛选的SIVQ6互作蛋白通过GO、KEGG和蛋白互作网络进行生物信息学分析。【结果】成功构建pGEX-4T-1-PC-SlVQ6基因重组表达质粒,并获得带有GST标签的GST-SlVQ6融合蛋白,其分子量大小约为54 kD;将GST-SlVQ6和His-SlMPK1进行体外磷酸化试验,SlMPK1能够磷酸化SlVQ6,而作为阴性对照的GST与SlMPK1无相互作用,且SlVQ6不存在自磷酸化的现象,表明GST-SlVQ6和His-SlMPK1具有相互作用,且SlVQ6是SlMPK1的下游底物;以GST-SlVQ6融合蛋白为诱饵蛋白(空GST为阴性对照),利用pull-down试验筛选番茄叶片组织蛋白中与SlVQ6蛋白结合的蛋白,经SDS-PAGE分离、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)鉴定以及Mascot与蛋白数据库检索,共鉴定出37个与SlVQ6结合的蛋白,包括蛋白激酶Receptor for Activated C Kinase 1B(RACK1B),通过GO、KEGG和蛋白互作网络的生物信息学分析,表明这些蛋白参与多种信号通路,其中8个核糖体蛋白可能与高温胁迫密切相关。【结论】SlVQ6是SlMPK1的底物蛋白,且37个蛋白可能与SlVQ6互作,这些蛋白与胁迫反应有着密切的联系,可能会在提高番茄植株高温耐受性等方面发挥重要作用。 展开更多
关键词 番茄 SlVQ6 SlMPK1 pull-down 互作蛋白
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GST pull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4潜在互作蛋白 认领 引用
11
作者 林翠 唐雯 +4 位作者 顾金燕 金玉兰 董伟仁 廖敏 周继勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-48,共9页
猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4。将质粒转染2... 猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4。将质粒转染293T细胞表达ORF4后,通过GSTPull-down试验捕获细胞内潜在与ORF4互作的蛋白库。经SDS-PAGE分离及银染后,对所得的特异性条带进行质谱鉴定,筛选出5个与ORF4潜在互作的蛋白,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6催化亚基、α心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14样蛋白5和肌球蛋白myosin 9。上述研究结果为深入揭示ORF4在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与方向。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF4蛋白 GSTpull-down 互作蛋白
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GST Pull-down实验鉴定NF-κB相互作用多肽 认领 引用 被引量：5
12
作者 李生茂 梁华平 +1 位作者 徐祥 刘东擘 《免疫学杂志》 CAS 北大核心 2006年第1期94-97,共4页
目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coliBL-21中诱导... 目的体外鉴定NF-κB相互作用多肽与p50和p65间的相互作用。方法首先构建GST-作用多肽融合蛋白的原核表达载体pET-42a/polypeptide及NF-κB p50和p65亚基保守结构域的原核表达载体pET22b/p50和pET22b/p65,并在大肠杆菌E.coliBL-21中诱导表达,后进行GST pull-down实验验证多肽与NF-κB p50和p65的结合效应。结果经诱导表达获得了可溶性的GST-多肽融合蛋白和具有DNA结合活性的p50p、65蛋白,GST pull-down实验证实3条多肽与p50发生特异地相互作用。结论证实3条多肽在体外能与p50发生物理性的相互作用,这为获得靶向NF-κB的功能拮抗多肽工作奠定了基础。 展开更多
关键词 GST Pull—down实验 多肽 NF—κB p50/p65 蛋白间相互作用
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应用GST pull-down技术筛选水稻抗稻瘟病蛋白PID3互作蛋白的研究 认领 引用 被引量：6
13
作者 赵文 王静 +4 位作者 李伟滔 王静 李晓兵 朱立煌 陈学伟 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期476-485,共10页
Pid3是从水稻中克隆获得的编码CC-NBS-LRR类蛋白的稻瘟病抗病基因。为了更深入地研究Pid3编码蛋白PID3介导的稻瘟病抗性的分子调节机制,我们应用GST pull-down结合质谱技术,对水稻抗稻瘟病蛋白PID3的互作蛋白进行了鉴定和分析。首先,成... Pid3是从水稻中克隆获得的编码CC-NBS-LRR类蛋白的稻瘟病抗病基因。为了更深入地研究Pid3编码蛋白PID3介导的稻瘟病抗性的分子调节机制,我们应用GST pull-down结合质谱技术,对水稻抗稻瘟病蛋白PID3的互作蛋白进行了鉴定和分析。首先,成功构建了带有GST标签且能够表达PID3的CC-NBS结构域的融合蛋白表达载体p GEX6P1-PID3CC-NBS,经诱导表达和GST beads纯化后获得GST-PID3CC-NBS融合蛋白。我们以Pid3的转基因水稻纯合株系Pid3-TP309为研究材料,分别用对其致病和不致病的稻瘟病菌生理小种ZB13和ZHONG-10-8-14接种,然后取叶片分别提取获得两组总蛋白。用纯化后的蛋白GST-PID3CC-NBS分别与两组总蛋白共培养后,利用GST pull-down技术获得了分别在抗病、感病反应中能与PID3CC-NBS互作的两组候选蛋白。通过质谱技术鉴定这些蛋白的氨基酸序列,比对分析其在抗病、感病途径中与PID3结合的差异性,我们共筛选出31个只在PID3介导的抗稻瘟病反应中能与其特异结合的PID3互作蛋白,这些互作蛋白包括受体激酶、LRR类蛋白、ATP酶、磷酸羧化酶和离子通道蛋白等,广泛参与了调控细胞程序化死亡、胁迫防御反应、物质与能量代谢和信号传导等多个生物学过程。本研究探寻了PID3介导的抗病信号转导过程的关键因子,研究结果为揭示PID3介导的稻瘟病抗病分子机理奠定了良好基础。 展开更多
关键词 抗稻瘟病 PID3 GST pull—down 互作蛋白 稻瘟病菌
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GST pull-down方法寻找组蛋白去乙酰化酶的互作蛋白研究 认领 引用 被引量：1
14
作者 宫艳超 张荟 赵伟伟 《天津化工》 CAS 2018年第1期17-20,共4页
用GST pull-down方法寻找组蛋白去乙酰化酶(HDACs)的互作蛋白,发现了HDAC8新的互作蛋白烯醇酶ENO1,ENO1在糖代谢过程中发挥着重要作用,ENO1参与HDAC8复合物发挥作用的过程。
关键词 GST pull-down 组蛋白去乙酰化酶 互作蛋白
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基于GST标准动作的贴袋免烫工艺模板设计与应用 认领 引用
15
作者 赵永刚 《上海纺织科技》 2026年第8期33-36,共4页
基于GST标准动作,设计并应用贴袋免烫工艺模板,以提升服装生产效率与产品质量。设计思路是将GST标准动作与模板结构、功能相结合,通过精确的尺寸设计与合理的材料选择来实现免烫效果。模板结构设计涵盖底板、盖板、推板等部分,各部件选... 基于GST标准动作,设计并应用贴袋免烫工艺模板,以提升服装生产效率与产品质量。设计思路是将GST标准动作与模板结构、功能相结合,通过精确的尺寸设计与合理的材料选择来实现免烫效果。模板结构设计涵盖底板、盖板、推板等部分,各部件选用耐用且成本适宜的材料。在实际应用中,工人按照规范步骤操作模板,可实现生产流程的优化。经评估,该模板显著提升了生产效率,产品合格率明显提高,成本得到有效降低。 展开更多
关键词 GST标准动作 贴袋免烫工艺 模板设计 模板应用
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辣椒GST基因家族鉴定及进化与表达分析 认领 引用 被引量：1
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作者 刘燕飞 段伟科 +3 位作者 唐凯 夏玲 张林青 黄志楠 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期83-94,共12页
谷胱甘肽S-转移酶(GST)在植物生长发育过程和抵抗非生物胁迫中扮演重要角色,探究辣椒CaGSTs的基本特性和表达模式,将为深入研究辣椒CaGST基因功能及蔬菜抗逆分子育种提供理论依据和基因资源。利用生物信息学方法鉴定辣椒GST基因家族,分... 谷胱甘肽S-转移酶(GST)在植物生长发育过程和抵抗非生物胁迫中扮演重要角色,探究辣椒CaGSTs的基本特性和表达模式,将为深入研究辣椒CaGST基因功能及蔬菜抗逆分子育种提供理论依据和基因资源。利用生物信息学方法鉴定辣椒GST基因家族,分析其染色体定位、基因结构、理化性质、进化关系及在不同组织和不同果实发育阶段中的表达特征等,利用RT-qPCR技术分析其在不同非生物胁迫下的表达模式。结果表明:在辣椒‘CM334’基因组中共鉴定到72个辣椒GST成员,随机分布在10条染色体上,其中9号染色体上分布最多;可分为10个亚家族,组间基因结构差异显著,串联复制是该基因家族扩张的主要原因;CaGST的表达具有组织特异性,其中CaGSTZ1在果皮和胎座发育后期高表达;非生物胁迫下,GaGSTU14、CaMGST1、CaTCHQD1和CaGSTF3分别对低温、高温、盐和干旱有显著响应。CaGSTZ1在果实PCR发育阶段起重要作用,CaGSTU14和CaGSTF3基因可能是辣椒抵抗高温与低温的关键基因。 展开更多
关键词 辣椒 GST 系统进化 表达分析 非生物胁迫
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Terahertz surface plasmonic logic gates based on GST metasurfaces 认领 引用
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作者 HUIRONG WANG QUAN LI +5 位作者 JIN LI YISHENG DONG YIFAN TANG GUANG ZHAO SHUANG WANG XUEQIAN ZHANG 《Photonics Research》 SCIE EI CAS CSCD 2026年第7期3167-3179,共13页
Optical logic gates have become one of the current hotspots due to their advantages such as high speed,low power consumption,and parallel processing capabilities.By utilizing surface plasmons(SPs)as information carrie... Optical logic gates have become one of the current hotspots due to their advantages such as high speed,low power consumption,and parallel processing capabilities.By utilizing surface plasmons(SPs)as information carriers and benefiting from the highly flexible designability of metasurfaces,this work proposes logic gate devices based on SP excitation.To achieve dynamic tunability in the design,the non-volatile phase-change material Ge2Sb2Te5(GST)is introduced into the metasurface design.Using the GST state and incident polarization state as two virtual inputs,and the presence or absence of SP excitation as the output,different types of logic gates are realized,with their operability demonstrated through experiments.The GST state is switched between the amorphous and crystalline states via thermal excitation and nanosecond laser pumping.This method features strong flexibility and high control freedom,holding broad application prospects in future on-chip photonic logic devices. 展开更多
关键词 surface plasmons sps Surface Plasmonic Logic Gates sp excitationto logic gate devices High Speed Terahertz optical logic gates GST Metasurfaces
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锈赤扁谷盗谷胱甘肽S-转移酶基因CfGSTe1和CfGSTd1与甲酸乙酯耐受性关系 认领 引用
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作者 张琪 陈二虎 +1 位作者 孙德宏 唐培安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2026年第5期1008-1019,共12页
【背景】谷胱甘肽S-转移酶(GST)作为昆虫体内的重要代谢酶类,在害虫对化学药剂耐受性的形成中发挥重要作用。甲酸乙酯因具有高效、低毒和低残留等特点,被视为具有应用潜力的绿色储粮熏蒸剂。【目的】分析锈赤扁谷盗(Cryptolestes ferrug... 【背景】谷胱甘肽S-转移酶(GST)作为昆虫体内的重要代谢酶类,在害虫对化学药剂耐受性的形成中发挥重要作用。甲酸乙酯因具有高效、低毒和低残留等特点,被视为具有应用潜力的绿色储粮熏蒸剂。【目的】分析锈赤扁谷盗(Cryptolestes ferrugineus)谷胱甘肽S-转移酶基因CfGSTe1和CfGSTd1与甲酸乙酯耐受性之间的关系,阐明锈赤扁谷盗对甲酸乙酯耐受性的分子机制。【方法】以不同磷化氢抗性水平的锈赤扁谷盗为材料,测定其对甲酸乙酯的药剂敏感性。通过顺丁烯二酸二乙酯协同试验,评估其对甲酸乙酯熏蒸杀虫作用的增效效应,并分析甲酸乙酯处理对GST活性的影响。基于锈赤扁谷盗转录组数据鉴定获得两个关键谷胱甘肽S-转移酶基因(CfGSTe1和CfGSTd1),并进行氨基酸序列和系统发育分析。进一步利用实时荧光定量PCR解析两基因的时空表达特征及其在甲酸乙酯熏蒸胁迫下的转录响应变化。最后,通过RNA干扰(RNAi)技术分别沉默CfGSTe1和CfGSTd1,分析其对锈赤扁谷盗甲酸乙酯耐受性的影响。【结果】生物测定结果表明,不同磷化氢抗性水平的锈赤扁谷盗对甲酸乙酯敏感性无显著差异,证实两种熏蒸剂间不存在交互抗性。增效剂顺丁烯二酸二乙酯可显著提高甲酸乙酯的熏蒸杀虫活性,且在药剂胁迫下锈赤扁谷盗GST活性显著升高。序列及进化树分析表明CfGSTe1和CfGSTd1分别编码216和215个氨基酸,均含有GST催化活性保守位点,属于Epsilon和Delta家族。实时荧光定量PCR结果显示,两基因均在成虫阶段显著高表达,主要在中肠、脂肪体和马氏管中表达,并可被甲酸乙酯熏蒸显著诱导。通过RNAi技术分别有效沉默CfGSTe1和CfGSTd1后,锈赤扁谷盗对甲酸乙酯耐受性显著降低,表现为熏蒸处理后成虫死亡率明显升高。【结论】谷胱甘肽S-转移酶基因CfGSTe1和CfGSTd1可能在锈赤扁谷盗对甲酸乙酯解毒代谢过程中发挥重要作用,暗示其与昆虫甲酸乙酯耐受性间存在密切关系。 展开更多
关键词 锈赤扁谷盗 甲酸乙酯 谷胱甘肽-S-转移酶 RNA干扰 实时荧光定量PCR
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GST理论与小学音乐欣赏的融合研究 认领 引用
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作者 许晓琳 《文理导航》 2026年第3期43-45,共3页
素质教育要求学校培养德智体美劳全面发展的小学生,除要加强知识教学活动外,还需培养学生的美德和品质。美术和音乐等学科教师肩负着美育的重要使命。音乐欣赏教学是美育的重要组成成分,能提升学生的艺术表现力、审美感知力与文化理解能... 素质教育要求学校培养德智体美劳全面发展的小学生,除要加强知识教学活动外,还需培养学生的美德和品质。美术和音乐等学科教师肩负着美育的重要使命。音乐欣赏教学是美育的重要组成成分,能提升学生的艺术表现力、审美感知力与文化理解能力,依据GST理论开展音乐欣赏教学,可取得更显著的成果。本文将探讨GST理论与小学音乐欣赏的融合策略。 展开更多
关键词 GST理论 小学音乐 欣赏教学
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GSTs在花生蚜对双丙环虫酯解毒代谢中的作用 认领 引用 被引量：1
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作者 薛超 段爱玲 +1 位作者 王爱玉 杨媛雪 《生物技术通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2025年第12期304-312,共9页
【目的】花生蚜(Aphis craccivora)是全球性重要农业害虫,严重威胁花生等作物的产量,双丙环虫酯为新型高效杀虫剂,对花生蚜等刺吸式口器害虫具有较好的防治效果,明确花生蚜对新型杀虫剂双丙环虫酯的代谢抗性机制,为科学制定田间防控策... 【目的】花生蚜(Aphis craccivora)是全球性重要农业害虫,严重威胁花生等作物的产量,双丙环虫酯为新型高效杀虫剂,对花生蚜等刺吸式口器害虫具有较好的防治效果,明确花生蚜对新型杀虫剂双丙环虫酯的代谢抗性机制,为科学制定田间防控策略提供理论依据。【方法】采用浸叶法测定花生蚜对双丙环虫酯的敏感性;通过酶活性测定与增效剂毒力实验评估谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GSTs)在解毒代谢中的作用;利用实时荧光定量PCR分析GSTs的组织表达谱、龄期表达谱及药剂诱导表达情况;结合RNA干扰技术鉴定关键抗性相关GSTs。【结果】双丙环虫酯处理后花生蚜GST活性显著升高,增效剂顺丁烯二酸二乙酯(DEM)预处理增加了花生蚜对双丙环虫酯的敏感性,表明GSTs可能参与解毒代谢作用。组织与龄期表达谱分析表明,花生蚜大部分的GSTs在中肠和脂肪体中高表达,且表达水平随发育进程呈显著上升趋势。双丙环虫酯可诱导GSTT2和GSTS2表达上调,RNA干扰GSTT2后,花生蚜对双丙环虫酯的敏感性显著提高。【结论】GSTT2在花生蚜响应双丙环虫酯胁迫、降低其敏感性中发挥重要作用,可为进一步探究花生蚜对双丙环虫酯的解毒机制奠定基础。 展开更多
关键词 花生蚜 GSTs 双丙环虫酯 解毒代谢
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