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Expression of O6-Methylguanine-DNA Methyltransferase Examined by Alkyl-Transfer Assays, Methylation-Specific PCR and Western Blots in Tumors and Matched Normal Tissue 认领 引用 被引量：1
1
作者 Kimiko Ishiguro Krishnamurthy Shyam +4 位作者 Philip G. Penketh Raymond P. Baumann Alan C. Sartorelli Thomas J. Rutherford Elena S. Ratner 《Journal of Cancer Therapy》 2013年第4期919-931,共13页
The tumor selectivity of alkylating agents that produce guanine O6-chloroethyl (laromustine and carmustine) and O6-methyl (temozolomide) lesions depends upon O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) activity bein... The tumor selectivity of alkylating agents that produce guanine O6-chloroethyl (laromustine and carmustine) and O6-methyl (temozolomide) lesions depends upon O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) activity being lower in tumor than in host tissue. Despite the established role of MGMT as a tumor resistance factor, consensus on how to assess MGMT expression in clinical samples is unsettled. The aim of this study is to examine the relationship between the values derived from distinctive MGMT measurements in 13, 12, 6 and 2 pairs of human tumors and matched normal adjacent tissue from the colon, kidney, lung and liver, respectively, and in human cell lines. The MGMT measurements included 1) alkyl-transfer assays using [benzene-3H]O6-benzylguanine as a substrate to assess functional MGMT activity, 2) methylation-specific PCR (MSP) to probe MGMT gene promoter CpG methylations as a measure of gene silencing, and 3) western immunoblots to analyze the MGMT protein. In human cell lines, a strict negative correlation existed between MGMT activity and the extent of promoter methylation. In tissue specimens, by contrast, the correlation between these two variables was low. Moreover, alkyl-transfer assays identified 3 pairs of tumors and normal tissue with tumor-selective reduction in MGMT activity in the absence of promoter methylation. Cell line MGMT migrated as a single band in western analyses, whereas tissue MGMT was heterogeneous around its molecular size and at much higher molecular masses, indicative of multi-layered post-translational modifications. Malignancy is occasionally associated with a mobility shift in MGMT. Contrary to the prevalent expectation that MGMT expression is governed at the level of gene silencing, these data suggest that other mechanisms that can lead to tumorselective reduction in MGMT activity exist in human tissue. 展开更多
关键词 O6-Methylguanine-DNA Methyltransferase (MGMT O6-Alkylguanine-DNA Alkyltransferase AGT) [Benzene-3H]O6-Benzylguanine Methylation-Specific PCR (MSP) Laromustine (Onrigin Cloretazine VNP40101M 101M) Temozolomide
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牛种布鲁菌S19疫苗株鉴别PCR检测方法的建立及应用 认领 引用 被引量：1
2
作者 吕皓晴 罗意 +2 位作者 袁律峰 储岳峰 许健 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第2期359-365,共7页
本研究建立1种能够快速鉴别牛种布鲁菌S19株的方法,并初步评价其应用价值。通过基因组共线性分析,鉴定牛种布鲁菌S19与A19基因组特异性区间,设计特异性引物。筛选出1对S19株PCR检测引物,建立了S19疫苗株鉴别诊断PCR检测方法,对该方法进... 本研究建立1种能够快速鉴别牛种布鲁菌S19株的方法,并初步评价其应用价值。通过基因组共线性分析,鉴定牛种布鲁菌S19与A19基因组特异性区间,设计特异性引物。筛选出1对S19株PCR检测引物,建立了S19疫苗株鉴别诊断PCR检测方法,对该方法进行优化后,进行特异性、灵敏度试验以及临床样本检测。结果表明,利用筛选出的最适引物建立了S19疫苗株鉴别诊断PCR检测方法,能特异性扩增出2个目的条带:S19(249 bp)、A19(954 bp),探索出最佳延伸时间和退火温度分别为20 s和60℃;对布鲁菌标准株及疫苗株DNA样品(S2308、M28、M5、M5-90、M5-90Δbp26、Rev.1、S2)也能进行区分;与其他病原(牛结核分枝杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌、牛支原体、大肠埃希菌、小肠结肠耶尔森菌)无交叉反应;对构建的阳性标准质粒的最低检测拷贝数S19为101拷贝/μL、A19为10~2拷贝/μL;46份布鲁菌临床样品经检测均符合预期。本研究建立的鉴别PCR方法可用于布鲁菌S19感染的快速鉴别诊断及流行病学调查,具有临床便捷、快速诊断的特点。 展开更多
关键词 布鲁菌 PCR S19 A19
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菜豆细菌性萎蔫病菌探针法实时荧光定量PCR检测技术的建立 认领 引用 被引量：1
3
作者 牟桂萍 闫晓东 +4 位作者 许然 胡加谊 曾杨森 黎玮琪 易建平 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期132-141,共10页
为快速准确检测菜豆细菌性萎蔫病菌(Curtobacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens,Cff),根据GenBank中Cff的序列设计特异性探针Cff-P,并首次建立了Cff探针法实时荧光定量PCR(TaqMan quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法。经... 为快速准确检测菜豆细菌性萎蔫病菌(Curtobacterium flaccumfaciens pv.flaccumfaciens,Cff),根据GenBank中Cff的序列设计特异性探针Cff-P,并首次建立了Cff探针法实时荧光定量PCR(TaqMan quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法。经验证,探针Cff-P能扩增供试的34株Cff菌株,其他66株供试的非Cff菌株以及空白对照均为阴性,不同稀释度菌体DNA的扩增结果显示,该方法的检测灵敏度为50 fg·μL-1菌体DNA。140个豆类种子样品的检测结果表明该检测方法可用于豆类种子样品中Cff的快速检测。本研究建立的TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测方法,为我国农业部门和进境口岸Cff快速筛查提供了技术支持。 展开更多
关键词 菜豆细菌性萎蔫病菌 检测 TaqMan探针法实时荧光定量PCR
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4种动物源性成分荧光定量PCR方法的建立及其在牛肉制品掺假鉴定中的应用 认领 引用 被引量：1
4
作者 夏琪琪 梁媛媛 +4 位作者 朱晨 郑方媛 孙丽萍 唐畅 刘鹏鹏 《食品工业科技》 EI CAS 北大核心 2026年第13期272-279,共8页
目的:针对目前市场上牛肉中使用鸡、鸭和猪肉掺假行为,本研究建立一种能够同时、快速鉴别牛肉制品中牛、鸡、鸭和猪4种动物源性成分的荧光定量PCR方法。方法:以细胞色素b(Cytb)基因为靶基因,设计并筛选牛、鸡、鸭、猪四组特异性引物及Ta... 目的:针对目前市场上牛肉中使用鸡、鸭和猪肉掺假行为,本研究建立一种能够同时、快速鉴别牛肉制品中牛、鸡、鸭和猪4种动物源性成分的荧光定量PCR方法。方法:以细胞色素b(Cytb)基因为靶基因,设计并筛选牛、鸡、鸭、猪四组特异性引物及TaqMan探针,构建单一反应体系;通过灵敏度、特异性、线性与检出限实验对方法进行系统验证。结果:该方法仅对牛、鸡、鸭和猪有特异性扩增,与其他动物的核酸无交叉反应;同时检测4种动物源性DNA的灵敏度为10-4ng/μL,检出限低至0.01%(质量比);对100份市售牛肉制品的分析显示,有24份样品掺假,且主要掺入成分为鸭肉和猪肉,实验结果与标准方法一致。结论:该方法具有快速、高效、成本低和高通量的特点,显著提升了肉类掺假检测能力,为食品安全监管和消费者权益保护提供了强有力的技术支持。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 牛肉制品 动物源性成分 肉类掺假
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猪圆环病毒2型和3型Taq Man双重荧光定量PCR方法的建立及应用 认领 引用 被引量：1
5
作者 韩峰 张军 +6 位作者 李铎 吴承月 闫才杰 王紫荷 王秀锦 刘吉英 张振东 《动物医学进展》 北大核心 2026年第2期21-28,共8页
通过比对GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)基因组序列,选取PCV2和PCV3 Cap基因片段的保守区间,各设计1对特异性引物和1条Taq Man MGB探针,优化各反应条件后,进行特异性、敏感性和重复性试验,建立鉴别PCV2与PCV3的Taq ... 通过比对GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)基因组序列,选取PCV2和PCV3 Cap基因片段的保守区间,各设计1对特异性引物和1条Taq Man MGB探针,优化各反应条件后,进行特异性、敏感性和重复性试验,建立鉴别PCV2与PCV3的Taq Man双重qPCR检测方法。结果显示,PCV2、PCV3阳性质粒标准品的最低检出浓度分别为102copies/μL、100copies/μL,敏感性较高;该方法可特异性扩增PCV2、PCV3的核酸,检测伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等其他6种病原核酸以及阴性对照均无交叉反应;组内与组间平行试验的变异系数(CV)值均在1%以下,R2值分别为0.983、0.996,表明稳定性、重复性较好;利用本研究建立的方法对母猪血、断奶仔猪血、睾丸液等431份临床样品进行检测,结果显示,PCV2和PCV3的阳性率分别为9.3%和37.1%,共感染的阳性率为8.4%。对获得的阳性序列进行测序分析,其中9条PCV2序列均属于2d型,19条PCV3序列中有18条序列属于3a型,2条序列属于3b型。研究成功建立了PCV2与PCV3 Taq Man双重qPCR方法,为两种疾病的临床鉴别及流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 PCV2 PCV3 双重Taq Man荧光定量PCR 混合感染
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GPV,GPMV,GoCV多重实时荧光定量PCR检测方法研究 认领 引用 被引量：2
6
作者 刘久源 辛鹏 +2 位作者 刘贤琳 王艺威 董浩 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期165-172,共8页
为快速精准判断吉林省内鹅细小病毒(GPV)、鹅副黏病毒(GPMV)和鹅圆环病毒(GoCV)的流行情况,以Taqman荧光定量PCR检测技术为基础,分别以VP3、F和Rep复制区为靶基因,设计3组不同的特异性引物和探针,建立能够同时检测3种常见雏鹅易感病毒... 为快速精准判断吉林省内鹅细小病毒(GPV)、鹅副黏病毒(GPMV)和鹅圆环病毒(GoCV)的流行情况,以Taqman荧光定量PCR检测技术为基础,分别以VP3、F和Rep复制区为靶基因,设计3组不同的特异性引物和探针,建立能够同时检测3种常见雏鹅易感病毒的检测方法。结果表明:建立的多重荧光定量检测方法仅对鹅细小病毒、鹅圆环病毒和鹅副黏病毒存在特异性扩增,与其他鹅类病毒或常见病原不存在交叉反应;最低检测限分别为6.59×101,5.57×101,4.89×101copies/μL,相较常规PCR灵敏性分别高103倍,102倍和102倍,且重复性较好,组间和组内变异系数均<2%。对50份样本进行检测,多重荧光定量PCR分别检测出4份GPV,2份GPMV,12份GoCV,GPV与GoCV混合感染1份,结果与常规PCR检测一致。建立的检测方法能够同时检测GPV,GPMV和GoCV 3种鹅类病毒,且检测效率较高,能够为3种鹅类易感病毒疫情的早期防控提供可靠技术支持。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 鹅副黏病毒 鹅圆环病毒 荧光定量PCR 探针法
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数字PCR在肉类及肉制品食源性致病菌检测中的应用进展 认领 引用 被引量：2
7
作者 唐琪 刘静 +1 位作者 曹若蕾 张岩 《河北省科学院学报》 CAS 2026年第1期57-63,81,共7页
肉类及肉制品是沙门氏菌属、弯曲杆菌属、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌等食源性致病菌的主要载体,其加工环节操作不当易引发全球公共卫生危机。传统检测技术包括培养法、免疫分析法、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法面临... 肉类及肉制品是沙门氏菌属、弯曲杆菌属、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌等食源性致病菌的主要载体,其加工环节操作不当易引发全球公共卫生危机。传统检测技术包括培养法、免疫分析法、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法面临时效性差、抗干扰弱、活/死菌无法区分等瓶颈。数字PCR(digital PCR,dPCR)通过微反应单元分区与泊松分布统计,实现肉类基质中病原体的免校准绝对定量,显著突破痕量检测极限。本文系统综述了dPCR在肉类及肉制品主要食源性致病菌检测中的应用,以期为食源性致病菌的风险防控与未来研究提供参考。 展开更多
关键词 数字PCR 肉类 肉制品 检测 食源性致病菌
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基于实时荧光PCR的微生态活菌制品中志贺菌、沙门菌快速检测法 认领 引用 被引量：1
8
作者 李杰 王家芳 +3 位作者 林鹏 李学红 张玉梅 钱云开 《质量安全与检验检测》 2026年第2期101-109,共9页
为建立微生态活菌制品中志贺菌和沙门菌的实时荧光PCR快速检测法。根据志贺菌ipaH基因、沙门菌invA基因,设计特异性引物和探针,进行实时荧光PCR扩增。结果显示,该方法特异性强、所需时间短、灵敏度高,志贺菌基因组DNA灵敏度可达到10^(-4... 为建立微生态活菌制品中志贺菌和沙门菌的实时荧光PCR快速检测法。根据志贺菌ipaH基因、沙门菌invA基因,设计特异性引物和探针,进行实时荧光PCR扩增。结果显示,该方法特异性强、所需时间短、灵敏度高,志贺菌基因组DNA灵敏度可达到10-4ng,供试品灵敏度达到2 CFU/g,沙门菌基因组DNA灵敏度可达到10-3ng,灵敏度达到2 CFU/g供试品,仅需24 h就可完成实验。单重实时荧光PCR检测2种菌需进行2次独立反应,而双重实时荧光PCR仅需一管反应即可完成2种菌的检测,提高了检测效率。该方法可作为《中国药典》微生态活菌制品中志贺菌和沙门菌检查法的补充方法。 展开更多
关键词 中国药典 微生态活菌制品 志贺菌 沙门菌 实时荧光PCR 双重实时荧光PCR检测
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马链球菌马亚种PCR和荧光定量PCR方法的建立及应用 认领 引用
9
作者 张风荣 郁蕾 +5 位作者 朱晓旻 薛俊欣 陈翔 陈梦洁 王艳 赵光伟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2026年第3期115-121,共7页
为建立马链球菌马亚种(Streptococcus equi subspecies equi,SEE)快速检测方法,本试验根据ICESe2基因(CP134538.1)的保守序列,设计特异性引物和荧光定量PCR探针,分别建立SEE的普通PCR和TaqMan荧光定量PCR检测方法并对临床样本进行检测... 为建立马链球菌马亚种(Streptococcus equi subspecies equi,SEE)快速检测方法,本试验根据ICESe2基因(CP134538.1)的保守序列,设计特异性引物和荧光定量PCR探针,分别建立SEE的普通PCR和TaqMan荧光定量PCR检测方法并对临床样本进行检测应用。结果显示普通PCR和荧光定量PCR的检测下限分别为600 copies/μL和60 copies/μL,两种检测方法对类鼻疽、马病毒性动脉炎、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、西尼罗核酸、马链球菌兽疫亚种核酸均为阴性,显示特异性良好;利用所建立方法对100份入境马匹样品进行检测,结果均为阴性,与细菌分离结果一致。综上,本试验建立的两种检测方法均具有良好的敏感性和特异性,可为马链球菌马亚种临床检测、流行病学调查及防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 马链球菌马亚种 PCR 荧光PCR 检测方法 灵敏度 特异性
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兽医实验室PCR检测核酸污染的监测与预防控制 认领 引用 被引量：1
10
作者 魏大伟 彭涛 +4 位作者 韩凯欧 唐超 熊海林 唐安文 易春华 《广东畜牧兽医科技》 2026年第1期116-120,共5页
PCR检测技术已经普及到各级兽医检测实验室,但微量的核酸污染很容易影响检测结果。该文通过分析核酸污染的主要来源,从采样方法、检测方法、监测时机、监测结果的确认等方面提出兽医实验室PCR检测环境监测方案,再通过实验室合理布局、... PCR检测技术已经普及到各级兽医检测实验室,但微量的核酸污染很容易影响检测结果。该文通过分析核酸污染的主要来源,从采样方法、检测方法、监测时机、监测结果的确认等方面提出兽医实验室PCR检测环境监测方案,再通过实验室合理布局、建立风险监测体系、加强人员培训、合理设置质控物、选择合适的检测方法和落实消毒工作等方面制定出预防和控制实验室环境污染的综合措施,从而达到有效控制兽医实验室PCR检测污染,减少出现假阳性结果的目的。 展开更多
关键词 PCR检测 污染 环境监测 预防控制
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黄瓜细菌性角斑病菌微滴数字PCR定量检测方法的建立与应用 认领 引用
11
作者 储天然 申永俊 +7 位作者 王艺凯 高苇 石延霞 谢学文 李磊 范腾飞 李宝聚 柴阿丽 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2026年第3期198-207,共10页
为实现黄瓜细菌性角斑病菌(Pal)的精准定量检测,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(gap1)为靶基因,设计了特异性引物Pal-F/R和探针Pal-Pro,建立了微滴数字PCR(ddPCR)定量检测方法。通过对退火温度、引物和探针浓度等关键参数进行优化,确定最佳... 为实现黄瓜细菌性角斑病菌(Pal)的精准定量检测,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(gap1)为靶基因,设计了特异性引物Pal-F/R和探针Pal-Pro,建立了微滴数字PCR(ddPCR)定量检测方法。通过对退火温度、引物和探针浓度等关键参数进行优化,确定最佳反应条件为退火温度61.2℃,反应体系中最佳引物和探针终浓度分别为600,250 nmol/L。该方法灵敏度高,对基因组DNA的检测下限为2.7拷贝/μL。利用建立的ddPCR方法,对32份采自发病和黄瓜棚室中的叶片菌脓、棚顶水滴及叶缘吐水样本进行检测,检出26份Pal阳性样本,较荧光定量qPCR方法(TaqMan qPCR)多检出3份,表明该方法在早期检测方面比qPCR具有更高的灵敏度。本研究建立的ddPCR检测方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可为黄瓜细菌性角斑病菌的绝对定量检测提供可靠的技术支持,对病害早期诊断和高效预警具有重要意义。 展开更多
关键词 黄瓜细菌性角斑病菌 微滴数字PCR 探针法荧光定量PCR gap1基因 定量检测
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细胞种属鉴别多重PCR法的优化及验证 认领 引用
12
作者 吴雪伶 张琪梦 +5 位作者 纳涛 魏山山 范珊珊 宗伟英 孟淑芳 杨志行 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2026年第2期180-188,共9页
目的对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证,使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量... 目的对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证,使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量进行优化,对优化后的方法进行灵敏度、交叉污染检测限度及不同实验室间的复核验证。结果优化后的方法可成功用于10个种属的细胞鉴别检测,方法灵敏度可达50~5000个细胞,交叉污染的检测水平可达1∶100~1∶10000,4家不同实验室均能利用该方法成功对细胞进行检测。结论优化后的细胞种属鉴别多重PCR法具有较好的专属性及检测细胞交叉污染的能力,可用于不同实验室的细胞种属鉴别检测,耐用性好,将为生产及检定用细胞的质量控制提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 细胞种属 鉴别 多重PCR法 线粒体
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基于直接PCR的转基因种子纯度快速检测方法 认领 引用
13
作者 翟杉杉 李俊 +4 位作者 肖芳 李允静 武玉花 高鸿飞 吴刚 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期168-181,共14页
种子纯度检测对于保证种子质量,提高作物产量具有重要意义。建立快速、准确、低成本的转基因种子纯度检测技术将为推进生物育种产业化发展提供有力支撑。本研究基于直接PCR技术提出了一种转基因种子纯度快速检测方案,包括:(1)利用自主... 种子纯度检测对于保证种子质量,提高作物产量具有重要意义。建立快速、准确、低成本的转基因种子纯度检测技术将为推进生物育种产业化发展提供有力支撑。本研究基于直接PCR技术提出了一种转基因种子纯度快速检测方案,包括:(1)利用自主研发的快速提取试剂,在常温下实现单粒种子研磨、提取同步进行,2分钟内一步式实现核酸提取,提取液无需纯化、直接作为模板进行实时荧光PCR扩增;(2)配制PCR反应体系;(3)样品分板;(4)高通量检测;(5)种子纯度计算。利用本方法对3种转基因大豆中黄6106、DBN9004、SHZD3201种子样品进行纯度检测,15份样品从制样到结果鉴定一个工作日内全部完成。该方法简化了现有纯度检测技术的操作步骤,显著缩短了分析时间,为转基因种子纯度检测提供了一种可靠的单粒快速检测新方法。 展开更多
关键词 转基因种子 纯度检测 DNA快速提取 直接PCR
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基于多重PCR的SNP基因分型及其在辣椒种质遗传多样性及关联分析中的应用 认领 引用
14
作者 黄月琴 陈学军 +5 位作者 方荣 周坤华 雷刚 李歌歌 方钰 袁欣捷 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期132-151,I0047-I0054,共20页
利用简化基因组测序数据,开发了一套基于多重PCR的SNP基因分型panel,包含170个核心SNP标记。利用该SNP panel及30个表型性状对202份辣椒种质进行分析,解析其遗传多样性,发掘辣椒优良表型性状的关联位点。结果表明,170个核心SNP标记分布... 利用简化基因组测序数据,开发了一套基于多重PCR的SNP基因分型panel,包含170个核心SNP标记。利用该SNP panel及30个表型性状对202份辣椒种质进行分析,解析其遗传多样性,发掘辣椒优良表型性状的关联位点。结果表明,170个核心SNP标记分布于12条染色体上,香农指数平均为0.616,多态性信息含量平均为0.334,基因多样性平均值0.428,说明供试材料遗传多样性较好。基于SNP标记的聚类分析、群体结构分析和主成分分析结果较为一致,均将供试材料划分为5个类群,各类群与地理来源和果实形态有一定相关性。30个表型性状变异系数在7.00%~87.88%之间、平均为34.85%,ShannonWiener多样性指数在0.03~2.07之间、平均为1.19,其中单果重的变异系数最大,商品果纵径的Shannon-Wiener多样性指数最大,花冠颜色变异系数和Shannon-Wiener多样性指数均最小;表型性状间大部分存在显著或极显著相关性。进一步对表型性状、SNP标记进行关联分析,结果表明,GLM和MLM两种方法共检测到53个SNP关联位点,与12个表型性状显著关联;GLM和MLM分别可以解释4.83%~48.41%和10.86%~19.19%的表型变异,其中位于4号染色体的980-003标记对花冠颜色的表型变异解释率最高;53个关联位点里有4个位点被两种方法同时检测到。本研究所开发的SNP基因分型panel是一种通量高、准确性好且成本低的基因型鉴定方法,可应用于辣椒遗传结构分析、分子标记辅助育种、品种鉴定等研究。此外,本研究还构建了202份辣椒种质表型性状和基因型数据库,有效地建立了表型与基因型的对应关系,为辣椒优异基因发掘、种质创新和品种遗传改良提供理论指导和材料基础。 展开更多
关键词 辣椒 SNP基因分型 多重PCR 遗传多样性 关联分析
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葡萄霜霉病LAMP显色法和LAMP-qPCR荧光法快速检测体系建立 认领 引用 被引量：1
15
作者 史芳芳 《安徽农业科学》 CAS 2026年第7期131-133,共3页
[目的]建立葡萄霜霉病菌快速分子检测方法,早期预测霜霉病发生。[方法]以葡萄霜霉病病叶提取的DNA为模板,根据霜霉病菌ITS序列设计LAMP引物;采用LAMP恒温显色法和恒温荧光法检测病株。[结果]LAMP显色法检测最低限可达36.5 fg/μL,LAMP... [目的]建立葡萄霜霉病菌快速分子检测方法,早期预测霜霉病发生。[方法]以葡萄霜霉病病叶提取的DNA为模板,根据霜霉病菌ITS序列设计LAMP引物;采用LAMP恒温显色法和恒温荧光法检测病株。[结果]LAMP显色法检测最低限可达36.5 fg/μL,LAMP荧光法检测最低限为36.5 pg/μL,显色法的灵敏度是荧光法的1 000倍。2种方法检测结果与霜霉菌的形态特征描述一致,确定葡萄患有霜霉病。[结论]该研究建立了葡萄霜霉病的快速分子检测体系,可用于病菌的早期诊断。 展开更多
关键词 葡萄霜霉菌 ITS序列 分子检测 LAMP扩增 实时荧光定量PCR
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基于TaqMan探针的羊口疮病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及安徽省部分地市流行毒株VIR基因的遗传变异分析 认领 引用
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作者 张留君 左国林 +7 位作者 冯星 陈威振 王爱扬 王波 陈佳乐 贺绍君 辛红雷 刘德义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第3期597-603,632,共7页
为建立羊口疮病毒(ORFV)快速准确的检测方法,并明确安徽省主要肉羊养殖区流行毒株的遗传演化特征,本研究构建了一种TaqMan实时荧光定量PCR方法,对采自安徽省重点养羊地区的303份临床样本进行检测;同时通过PCR扩增阳性样品中ORFV的全长VI... 为建立羊口疮病毒(ORFV)快速准确的检测方法,并明确安徽省主要肉羊养殖区流行毒株的遗传演化特征,本研究构建了一种TaqMan实时荧光定量PCR方法,对采自安徽省重点养羊地区的303份临床样本进行检测;同时通过PCR扩增阳性样品中ORFV的全长VIR基因,并进行测序与遗传变异分析。结果显示,所建立的实时荧光定量PCR方法可在约30 min内完成检测,对ORFV基因组DNA的检测下限为4.28拷贝/μL,且与其他5种常见病毒核酸无交叉反应,批内和批间扩增变异系数(Cv)均低于1.33%。临床样本检测结果显示,ORFV阳性率为48.84%(148/303)。对阳性样本中的ORFV全长VIR基因进行常规PCR扩增,获得64条完整的VIR基因DNA序列(山羊源33条,绵羊源31条)。序列分析显示,64条样本毒株VIR基因DNA及其氨基酸序列的同源性分别为95.1%~100%和92.4%~100%。其中,33条山羊源毒株VIR基因DNA与氨基酸序列的同源性分别为95.1%~100%和92.4%~100%,其氨基酸突变位点主要位于Q24H、S101A、S124P和A154T等处。31条绵羊源毒株VIR基因DNA与氨基酸序列的同源性为99.5%~100.0%,其氨基酸突变位点主要分布于R14S、D17G、D47N、M97L、M103I、H122R、K135E、L140R、A154V和A169T等处。进化树分析显示,33条山羊源毒株(Group 1)与31条绵羊源毒株(Group 2)分别位于遗传距离较远的两大分支。其中,山羊源毒株与我国山西、台湾、云南、吉林、福建和陕西山羊参考毒株亲缘关系较近;绵羊源毒株则与新疆、河南、甘肃和广西绵羊参考毒株亲缘关系较近。本研究建立了一种可快速检测ORFV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并揭示安徽省山羊源与绵羊源ORFV毒株VIR基因具有不同的突变模式且存在显著的遗传差异,为该病的防控提供了科学依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 TaqMan探针 荧光定量PCR VIR基因
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基于ISSR、SCAR及荧光定量PCR技术鉴别菊花脑和野菊 认领 引用
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作者 王孟虎 徐义菁 +9 位作者 张蕴蕴 孟祥松 张文海 左亚锋 王新阳 徐秀泉 刘文苹 栗进才 俞浩 孙一帆 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2026年第4期322-332,共11页
目的:利用ISSR、SCAR分子标记技术设计菊花脑特异性引物,采用普通PCR及SYBR荧光定量PCR对菊花脑、野菊进行快速鉴别。方法:查阅文献确定48条ISSR引物,基于ISSR引物对菊花脑、野菊的DNA进行PCR扩增电泳,确定1条ISSR引物能够鉴别菊花脑、... 目的:利用ISSR、SCAR分子标记技术设计菊花脑特异性引物,采用普通PCR及SYBR荧光定量PCR对菊花脑、野菊进行快速鉴别。方法:查阅文献确定48条ISSR引物,基于ISSR引物对菊花脑、野菊的DNA进行PCR扩增电泳,确定1条ISSR引物能够鉴别菊花脑、野菊,并对退火温度、引物量、模板量、循环次数进行研究。对菊花脑特征条带进行胶回收、单克隆和测序,根据测序结果设计菊花脑特异性引物。利用普通PCR及SYBR荧光定量PCR分别对引物特异性进行验证及检测限考察,并分别对市售菊花脑、野菊花样品进行鉴定。结果:ISSR-35引物可以准确鉴别菊花脑、野菊,菊花脑在500 bp左右有特征条带,最佳退火温度、引物量、模板量、循环次数分别为57℃,1μL,0.5μL,35次。基于菊花脑特征条带的碱基序列设计菊花脑特异性引物,当退火温度为65℃时,菊花脑电泳条带约在250 bp处有单一条带,野菊无条带,且重现性良好。SYBR荧光定量PCR结果显示,菊花脑样品出现有效扩增曲线,并在熔解曲线中形成单一特异性峰,Tm值为77℃;野菊样品未出现有效扩增曲线,且未检出特异性熔解峰。利用特异性引物对市售野菊花进行检测,结果显示野菊花中存在2批次菊花脑。结论:根据ISSR、SCAR分子标记获得的特征条带测序碱基序列设计的特异性引物,能够准确、快速鉴别菊花脑和野菊。 展开更多
关键词 野菊 菊花脑 ISSR SCAR 特异性引物 SYBR荧光定量PCR 鉴别
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基于HSP90基因的羊吕氏泰勒虫PCR检测方法的建立与评价 认领 引用
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作者 翟斌涛 郑红飞 +5 位作者 李甲 包碧波 孙万奎 王义军 王耀东 张继瑜 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2026年第3期85-90,共6页
吕氏泰勒虫是一种严重危害养羊业的血液原虫,建立快速、准确的检测方法对其防控至关重要。为开发一种以羊吕氏泰勒虫热休克蛋白90基因(HSP90)为新靶标的PCR检测方法,本研究根据吕氏泰勒虫HSP90基因序列设计特异性引物,通过梯度PCR优化... 吕氏泰勒虫是一种严重危害养羊业的血液原虫,建立快速、准确的检测方法对其防控至关重要。为开发一种以羊吕氏泰勒虫热休克蛋白90基因(HSP90)为新靶标的PCR检测方法,本研究根据吕氏泰勒虫HSP90基因序列设计特异性引物,通过梯度PCR优化反应条件,并对方法的敏感性、特异性和重复性进行系统评价。结果表明,本研究建立的PCR检测方法的最佳退火温度为60.5℃,退火时间为30 s。对该方法进行的性能评价结果表明,其敏感性高,最低可检测到32.4 pg/μL的基因组DNA(敏感性较18S rRNA靶标提高了3倍以上);特异性强,与豆状囊尾蚴、多房棘球蚴、弓形虫及球虫的DNA均无交叉反应;重复性好,在不同批次和批内试验中结果稳定。对现场采集的羊血液样品的检测结果表明,18份样品的阳性检出率为27.78%,测序结果表明扩增产物为吕氏泰勒虫。本研究成功建立了基于HSP90基因的羊吕氏泰勒虫PCR检测方法。该方法具有高效、灵敏、特异和可靠的优点,不仅为吕氏泰勒虫的流行病学调查和精准诊断提供了新的有效工具,而且由于HSP90在泰勒虫应激生存和致病中的关键作用,本研究也为后续探索其基因功能、开发靶向药物奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 羊 吕氏泰勒虫 HSP90基因 PCR 检测方法
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16SrⅡ组槟榔黄化植原体巢式PCR检测方法的建立 认领 引用
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作者 林兆威 唐庆华 +2 位作者 于少帅 龙仕达 宋薇薇 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2026年第3期694-701,共8页
在中国,引起槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,AYLD)的植原体主要有16SrⅠ组、16SrⅡ组及16SrXXXⅡ组3个种群,但目前的检测技术主要针对16SrⅠ组或3个种群的共同检测,缺乏对16SrⅡ组植原体的特异性识别手段。为了对16SrⅡ组... 在中国,引起槟榔黄化病(areca palm yellow leaf disease,AYLD)的植原体主要有16SrⅠ组、16SrⅡ组及16SrXXXⅡ组3个种群,但目前的检测技术主要针对16SrⅠ组或3个种群的共同检测,缺乏对16SrⅡ组植原体的特异性识别手段。为了对16SrⅡ组槟榔黄化植原体进行特异性检测,本研究基于16SrⅡ组植原体核糖体蛋白(rp)基因序列,设计并筛选特异性巢式PCR引物,并对该方法的特性及其应用效果进行评估。结果显示,在准确性方面,该方法能准确区分出阳性和阴性样品;在敏感性比较中,该方法敏感性高于16S rRNA和tuf基因的通用巢式PCR检测;在特异性评估中,16SrⅠ组和16SrXXXⅡ组植原体、供试的槟榔病原及内生菌均对本方法未造成干扰;在应用中,从海南文昌采集的22份槟榔样品检测出4份阳性样品,并且可检测出属于16SrⅡ组的银胶菊丛枝植原体、皱子鸟足菜丛枝植原体及花生丛枝植原体,表现出较好的适用性。综上,本研究建立的基于rp基因的巢式PCR方法对16SrⅡ组槟榔黄化植原体检测具有较好的特异性,可为16SrⅡ组槟榔黄化植原体的田间诊断、病情监测提供技术参考。 展开更多
关键词 槟榔 槟榔黄化病 植原体检测 巢式PCR
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牛疱疹病毒4型微滴数字PCR检测方法的建立与应用 认领 引用
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作者 程悦宁 王振军 +8 位作者 曹泽昭 王春霞 吴丹妮 周雅茜 李响 闫曼平 关继羽 张竞 张海丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第5期1099-1104,共6页
基于4型牛疱疹病毒(bovine herpesvirus 4,BoHV-4)gB基因保守区,设计并筛选特异性引物与探针,通过优化反应体系与扩增程序,建立了检测BoHV-4的微滴式数字PCR,并应用该方法对临床样品进行了检测。结果显示,ddPCR法检测BoHV-4的最适引物... 基于4型牛疱疹病毒(bovine herpesvirus 4,BoHV-4)gB基因保守区,设计并筛选特异性引物与探针,通过优化反应体系与扩增程序,建立了检测BoHV-4的微滴式数字PCR,并应用该方法对临床样品进行了检测。结果显示,ddPCR法检测BoHV-4的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为58℃,最低检测下限为3.9 copies/μL,该方法线性范围良好(R2>0.99);特异性强,除BoHV-4特异性扩增外,其他常见病毒特异性试验结果均为阴性;重复性高(Cv<5%);对收集的208份牛源临床样品进行检测,结果与qPCR一致性良好。本研究建立的ddPCR方法为BoHV-4的早期感染监测、病毒载量分析及流行病学调查提供了可靠的技术支持。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒4型 微滴数字PCR 定量检测
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