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细胞种属鉴别多重PCR法的优化及验证 认领 引用
1
作者 吴雪伶 张琪梦 +5 位作者 纳涛 魏山山 范珊珊 宗伟英 孟淑芳 杨志行 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2026年第2期180-188,共9页
目的对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证,使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量... 目的对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证,使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量进行优化,对优化后的方法进行灵敏度、交叉污染检测限度及不同实验室间的复核验证。结果优化后的方法可成功用于10个种属的细胞鉴别检测,方法灵敏度可达50~5000个细胞,交叉污染的检测水平可达1∶100~1∶10000,4家不同实验室均能利用该方法成功对细胞进行检测。结论优化后的细胞种属鉴别多重PCR法具有较好的专属性及检测细胞交叉污染的能力,可用于不同实验室的细胞种属鉴别检测,耐用性好,将为生产及检定用细胞的质量控制提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 细胞种属 鉴别 多重PCR法 线粒体
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DHAV-1、DAstV-1、DHAV-3和APMV-1四重PCR检测方法的建立及应用 认领 引用
2
作者 李海名 吴晓燕 +3 位作者 康华裕 王旭 王一涵 张彦龙 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2026年第2期94-99,共6页
为了建立一种能同时检测鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭星状病毒1型(DAstV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)和禽副黏病毒1型(APMV-1)的方法,试验根据GenBank中公布的DHAV-13A基因、DAstV-11a基因、DHAV-33a3b基因和APMV-1 F基因序列分别设计4对... 为了建立一种能同时检测鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭星状病毒1型(DAstV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)和禽副黏病毒1型(APMV-1)的方法,试验根据GenBank中公布的DHAV-13A基因、DAstV-11a基因、DHAV-33a3b基因和APMV-1 F基因序列分别设计4对特异性引物,通过优化反应条件及特异性、敏感性和重复性试验建立了四重PCR检测方法,并采用该方法对96份疑似病毒感染的鸭病料样本进行检测。结果表明:DHAV-1、DHAV-3、DAstV-1和APMV-1四重RT-PCR检测方法的最优退火温度和引物浓度分别为56℃、0.8μmol/L。该方法能同时扩增出大小为195 bp(DHAV-13A基因)、289 bp(DAstV-11a基因)、462 bp(DHAV-33a3b基因)、726 bp(APMV-1基因)的特异性片段,而与鸭瘟病毒(DPV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鸭甲肝病毒2型(DHAV-2)无交叉反应;对DHAV-1、DAstV-1、DHAV-3和APMV-1的最低检测限分别为1.111×10~4 copies/μL、3.078×10~2 copies/μL、4.938×10~3 copies/μL、3.456×10~2 copies/μL;批间重复试验和批内重复试验的3个平行样本的结果均一致。采用该方法对96份临床样本的检测结果与参考方法的符合率为100%。说明本研究建立的针对DHAV-1、DHAV-3、DAstV-1和APMV-1四重PCR检测方法特异性强、敏感性较高、重复性好,在临床样本检测中展现出良好的应用效果。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒 鸭星状病毒 禽副黏病毒1型 混合感染 多重PCR检测方法 检测方法建立
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One-Step Multiplex PCR for Simultaneous Detection and Identification of Eight Medically Important CandidaSpecies 认领 引用 被引量：7
3
作者 Akira Fukatsu Osamu Tsuzukibashi +13 位作者 Hidenori Suzuk Katsuhiro Asaka Yoshinori Ono Mana Fuchigami Taira Kobayashi Satoshi Uchibori Yuji Takahashi Chiaki Komine Yoshimi Konishi Yuki Ogura Hiroko Omori Masanobu Wakami Hiroshi Murakami Masahiko Fukumoto 《Open Journal of Stomatology》 2021年第1期14-24,共11页
Recently, the incidence of Candida infections has substantially increased. Conventional identification methods for Candida species are technically difficult to conduct and cannot accurately distinguish each speci... Recently, the incidence of Candida infections has substantially increased. Conventional identification methods for Candida species are technically difficult to conduct and cannot accurately distinguish each species. The purpose of the present study was to design primers to identify and detect simultaneously eight medically important Candida species using one-step multiplex PCR. PCR primers were designed based on partial sequences of intergenic spacer (IGS) and internal transcribed spacer (ITS) genes of eight medically important Candida species. These primers were able to distinguish each Candida species and did not display cross-reactivity with representative Candida species other than the eight Candida species. Moreover, our developed one-step multiplex PCR method is accurate, specific, cost-effective, time-saving, and worked without requiring DNA extraction. 展开更多
关键词 Candida Candida albicans One-Step Multiplex PCR PCR Method
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A型塞内卡病毒和水泡性口炎病毒多重纳米PCR方法的建立及初步应用 认领 引用
4
作者 李晓君 兰云刚 +7 位作者 赵越 李思锐 尚丽元 呼延含蓉 宋斯伟 贺文琦 高飞 王改丽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2025年第5期934-939,970,共6页
由于A型塞内卡病毒(SVA)、水泡性口炎病毒(VSV)新泽西血清型(VSNJV)和印第安纳血清型(VSIV)均可感染猪群,引起口唇及蹄部水疱性损伤,且临床症状相似,易造成误诊。因此,本研究根据SVA-P基因、VSNJV-N基因、VSIV-N基因的保守区分别设计了... 由于A型塞内卡病毒(SVA)、水泡性口炎病毒(VSV)新泽西血清型(VSNJV)和印第安纳血清型(VSIV)均可感染猪群,引起口唇及蹄部水疱性损伤,且临床症状相似,易造成误诊。因此,本研究根据SVA-P基因、VSNJV-N基因、VSIV-N基因的保守区分别设计了3对特异性引物,优化了退火温度、引物浓度及反应体系;并利用纳米金材料,建立了一种能同时检测SVA、VSNJV和VSIV的新型、快速、灵敏的多重纳米PCR检测方法。特异性试验结果表明,该检测方法可特异性扩增SVA、VSNJV和VSIV目的基因,且与猪伪狂犬病毒(PRV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)和猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)均无交叉反应性。敏感性试验结果显示,该检测方法的最低核酸检测限为10拷贝/μL,敏感性较好。此外,最优引物比对不同批次的酶和质粒反应性良好,稳定性强。应用该方法对50份病猪样品进行检测,检出SVA阳性样品7份,普通单一PCR方法检出SVA阳性样品5份;2种检测方法均未检出VSNJV和VSIV阳性。结果表明,本研究建立的多重纳米PCR方法在检测SVA、VSNJV和VSIV方面具有更高的特异性和敏感性,可为猪病毒性水疱性疾病的快速鉴别诊断及防控提供技术支持。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 水泡性口炎病毒 多重纳米PCR方法
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产毒艰难梭菌多重实时荧光PCR检测方法的建立与应用 认领 引用 被引量：1
5
作者 殷仑仑 万旺 +3 位作者 邓中平 田向荣 周强 任小梅 《生命科学研究》 CAS 2025年第1期62-68,共7页
本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA(毒素A基因)、tcdB(毒素B基因)、cdtB(二元毒素B亚基基因)和TPI(丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特... 本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA(毒素A基因)、tcdB(毒素B基因)、cdtB(二元毒素B亚基基因)和TPI(丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特异性引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系;然后,优化该体系中的引物、探针以及退火温度,并检测优化后体系的灵敏度、特异性、重复性等;最后,将其应用于临床样本检测。结果表明,该方法特异性强、重复性好、成本低,能够检测1000 copies/mL的样本,与其他常见肠道致病菌无交叉反应。 展开更多
关键词 艰难梭菌 毒力基因 多重实时荧光PCR 检测方法
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单管闭管多重PCR检测技术的发展 认领 引用 被引量：2
6
作者 胡婷婷 张云龙 邹秉杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2025年第8期1115-1126,共12页
核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和... 核酸检测技术因快速、灵敏和特异等特点,在病原体检测等领域广泛应用。因疾病相关的核酸标志物众多,多重核酸检测需求渐增。多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)可对多种靶标同时扩增,但扩增后分析过程存在开管易污染和技术要求高等问题。随着检测技术的不断进步,一系列简便和可靠且无需开管处理的单管多重PCR检测技术相继出现。常见的技术有基于荧光探针的单管闭管多重PCR检测方法,主要利用不同荧光标记对多种靶标进行区分,与不同的特异性酶切反应结合,能够实现肿瘤罕见突变的多重检测以及单核苷酸特异性分型。此外,基于熔解温度差异的单色熔解曲线分析方法,在单个荧光通道内实现了多靶标并行检测,若在多个荧光通道内进行则称为多色熔解曲线分析方法,可将检测靶标数量提升至数十种,显著突破了荧光通道数量对检测重数的限制。同时,利用荧光标记进行不同组合的荧光编码方法,也为单管闭管多重PCR检测提供了新的思路,包括编码同一靶标对应的不同荧光标记产生信号的先后顺序、利用2种荧光标记组合识别特定靶标、控制不同靶标荧光信号幅度等方式,也能够提高检测重数。本文从原理、应用及方法优缺点等多个维度出发,对近年来单管闭管多重PCR检测技术的研究进展进行概括并展望,为此后的科研探索与应用提供有价值的参考。 展开更多
关键词 核酸检测 多重核酸检测 聚合酶链式反应 单管反应 检测方法
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猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和3型三重PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：9
7
作者 崔建涛 侯承尧 +4 位作者 党钰茗 徐通 赵宇 田润博 陈红英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期432-437,共6页
为了建立能够同时检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)单一或混合感染的PCR检测方法,参考GenBank中PRV gE基因、PCV2和PCV3全基因序列,针对PRV gE、PCV2 Rep和PCV3 Rep基因的保守区域,利用Primer 5.0设... 为了建立能够同时检测猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)单一或混合感染的PCR检测方法,参考GenBank中PRV gE基因、PCV2和PCV3全基因序列,针对PRV gE、PCV2 Rep和PCV3 Rep基因的保守区域,利用Primer 5.0设计3对特异性引物,随后对其扩增条件进行优化,建立能够同时检测PRV、PCV2和PCV3的三重PCR方法。该方法能同时扩增PRV的429 bp、PCV2的273 bp和PCV3的344 bp特异性片段,而对常见的其他猪病原扩增均为阴性。PRV、PCV2和PCV3的最低检出量分别为1 250.0、693.0和91.2拷贝/μL。运用三重PCR和单项PCR检测疑似患有母猪繁殖障碍或呼吸系统疾病的74份临床病料,发现PRV、PCV2和PCV3的阳性率分别为29.73%(22/74)、71.62%(53/74)和58.11%(43/74),且三重PCR与单项PCR检测结果的符合率为100%。本试验建立了能够同时检测PRV、PCV2和PCV3的三重PCR检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性和准确性,为PRV、PCV2和PCV3的临床诊断和监测提供技术支持。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 三重PCR
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荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌多重PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：22
8
作者 胡冰雪 舒沿沿 +2 位作者 潘道东 曾小群 吴振 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第20期209-214,共6页
针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌... 针对肉制品中易污染的荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌等有害微生物,通过3种标准菌株及肉制品建立多重聚合酶链式反应方法,实现肉制品中这3种菌的同时、快速检测。利用荧光假单胞菌的gyrB基因、沙门氏菌的invA基因和单增李斯特菌的hly A基因设计3对特异性引物,在确定引物特异性的基础上,对3种标准菌株及在冷却肉上过夜富集后进行灵敏度检测。结果表明,该多重聚合酶链式反应方法对于同时检测这3种有害微生物具有高度的特异性;同时检测这3种菌时,纯菌DNA检测限可达1 pg/μL;将3种菌一起接种到冷却肉中35℃过夜培养后,荧光假单胞菌、沙门氏菌和单增李斯特菌的检测限分别可达到9、5、70 CFU/m L。 展开更多
关键词 多重聚合酶链式反应 检测方法 荧光假单胞菌 沙门氏菌 单增李斯特菌
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牛病毒性呼吸道疾病主要病原多重PCR检测方法的建立与应用 认领 引用 被引量：12
9
作者 张晓梅 姜晓霞 +5 位作者 孙晓波 王以欣 马莹莹 乔薪瑗 徐义刚 贾烁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期957-963,共7页
为建立对牛呼吸道疾病综合征(BRDC)进行快速而准确的病原学检测方法,基于牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g B 基因、牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 5′UTR 基因、牛副流感病毒 3 型(BPIV3)HN 基因和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) N 基因设计检测引物,... 为建立对牛呼吸道疾病综合征(BRDC)进行快速而准确的病原学检测方法,基于牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)g B 基因、牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 5′UTR 基因、牛副流感病毒 3 型(BPIV3)HN 基因和牛呼吸道合胞体病毒(BRSV) N 基因设计检测引物,经过条件优化,建立了检测 IBRV、BVDV、BPIV3 和 BRSV的多重 PCR 方法。 该方法具有良好的特异性和灵敏性,可特异性地同时检测 IBRV、BPIV3、BRSV 和 BVDV,灵敏度分别为 5.86×103、2.42×103、1.02×104和 5.02×104copies/ μL,且重复性良好。 利用该方法对采集的309 份具有呼吸道症状牛的鼻腔拭子进行检测 ,结果显示 ,IBRV、BVDV、BPIV3 和 BRSV 的阳性率分别为6.15%、28.16%、18.12%和 33.66%,其中 BVDV 与 BRSV 的混合感染率为 5.18%,BVDV 与 BPIV3 的混合感染率为 1.62%,BRSV 与 BPIV3 的混合感染率为 4.21%,BVDV、BRSV 与 BPIV3 的混合感染率为 0.97%。该多重 PCR 方法的建立为 BRDC 主要病毒的鉴别检测及流行病学调查提供了必要的技术支撑。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 牛病毒性腹泻病毒 牛副流感病毒3型 牛呼吸道合胞体病毒 多重PCR方法
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7种猪呼吸道综合征疾病病原多重PCR方法的建立 认领 引用 被引量：11
10
作者 任梅渗 冷依伊 +4 位作者 蒙正群 张鹏飞 杨泽晓 姚学萍 王印 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期47-53,共7页
为建立能够同时检测7种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,参考伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(PM)以及胸膜肺炎放线杆菌(APP)标... 为建立能够同时检测7种导致猪呼吸道综合症疾病病原的多重PCR方法,参考伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、多杀性巴氏杆菌(PM)以及胸膜肺炎放线杆菌(APP)标准毒株序列,选择各病毒和细菌的保守序列分别设计7对特异性引物进行多重PCR。各项优化试验结果表明,当反应的退火温度为51℃,各条引物浓度均为0.8μmol/L时扩增的目的条带效果最佳;用敏感性试验检测该反应中各病毒的最小检出量分别为:1.01×10~2(PRV)、1.48×10~3(CSFV)、1.07×10~4(ASFV)、9.73×10~3(PRRSV)、1.82×10~3(HPS)、1.65×10~3(PM)和3.64×10~3(APP)copies/μL。在最优化的反应条件下进行特异性试验,结果未出现交叉反应,能检出对应病原的多种血清型,阴性对照均无非特异性扩增。该方法快捷、灵敏、特异性高,可为临床诊断与流行病学研究提供科学依据。 展开更多
关键词 猪 呼吸道疾病 多重PCR 检测方法
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转基因抗草甘膦油菜的实用PCR检测方法 认领 引用 被引量：17
11
作者 潘爱虎 张大兵 +3 位作者 潘良文 陈家华 袁政 梁婉琪 《中国农业科学》 CAS 北大核心 2003年第7期856-860,共5页
利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基... 利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基因。这种方法可以有效地用于转基因抗草甘膦油菜中的外源基因的检测。 展开更多
关键词 转基因抗草甘膦油菜 PCR检测方法 灵敏度 外源基因 检测技术
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马铃薯5种病毒多重PCR检测技术的建立及应用 认领 引用 被引量：34
12
作者 罗文彬 李华伟 +5 位作者 汤浩 邱思鑫 纪荣昌 许泳清 刘中华 邱永祥 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期280-288,共9页
采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法。根据Gen Bank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循... 采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯M病毒(PVM)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯A病毒(PVA)和马铃薯S病毒(PVS)的方法。根据Gen Bank中PVX、PVM、PVY、PVA及PVS(CP)基因序列设计特异引物,对多重RT-PCR退火温度、循环次数、延伸温度、引物组合浓度进行优化,建立了能同时检测5种马铃薯病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PVX、PVM、PVY、PVA及PVS特异片段,其大小分别是138、213、369、468和657 bp。测序结果表明,5种病毒的序列与相应参考序列相似性达到97%以上。灵敏度分析结果表明,多重RT-PCR方法能够检测植物组织量为10-3 mg。应用建立的多重RT-PCR检测方法对田间样品和组培苗进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的5种马铃薯病毒。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒 检测方法 多重RT-PCR
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A型塞尼卡病毒与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：10
13
作者 谢守玉 刘惠心 +7 位作者 施开创 赵晶 屈素洁 尹彦文 王树培 陆文俊 冯淑萍 粟艳琼 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期905-911,共7页
为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经... 为建立鉴别A型塞尼卡病毒(SVA)与O型、亚洲I型、A型口蹄疫病毒(FMDV)的快速检测方法,本研究分别设计4对特异性引物,用于扩增SVA 3D基因(157 bp)、O型FMDV VP1基因(240 bp)、亚洲I型FMDV VP1基因(460 bp)、A型FMDV VP1基因(320 bp)。经优化引物浓度、退火温度等反应条件,初步建立了同时检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV的多重RT-PCR方法。利用该方法同时检测SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型(PCV2)、PCV3等主要猪源病毒,结果显示该方法仅对SVA及O型、亚洲I型、A型FMDV检测为阳性,其他均为阴性,特异性较强;SVA、O型、亚洲I型、A型FMDV重组质粒标准品10倍倍比稀释后利用本研究建立的多重RT-PCR方法检测,结果显示同一反应体系中,4种重组质粒标准品的检出下限均为2.5×10^2拷贝/μL,敏感性较高;批内、批间重复性试验结果一致,该方法重复性较好。利用本实验建立的方法对2019年采集自广西30份临床疑似样品进行检测,结果显示,SVA、O型FMDV的阳性检出率分别为16.67%和63.33%;未检出亚洲I型及A型FMDV;同时采用国家标准《口蹄疫诊断技术》(GB/T18935-2003)中RT-PCR方法以及文献报道的SVA套式RTPCR方法对FMDV、SVA检测,结果与本实验建立的多重RT-PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究首次建立的多重RT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,为鉴别检测SVA与O型、亚洲I型、A型FMDV提供了有效的技术方法。 展开更多
关键词 A型塞尼卡病毒 口蹄疫病毒 多重RT-PCR 检测方法
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加工食品中动物源DNA的提取和多重PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：10
14
作者 何海宁 洪霞 +6 位作者 冯玉升 汪永松 金莹 袁彩霞 钱滢文 刘琦 高志莹 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2015年第6期79-83,共5页
为了从深加工食品中提取高质量和数量的动物源性DNA片段,以优化后CTAB方法提取,用于PCR检测。根据鸭线粒体基因序列,设计合成检测鸭源性成分引物,进行PCR体系和反应条件的优化筛选,建立三重PCR方法;同时扩增出牛源性116bp、猪源性212bp... 为了从深加工食品中提取高质量和数量的动物源性DNA片段,以优化后CTAB方法提取,用于PCR检测。根据鸭线粒体基因序列,设计合成检测鸭源性成分引物,进行PCR体系和反应条件的优化筛选,建立三重PCR方法;同时扩增出牛源性116bp、猪源性212bp和鸭源性322bp目的基因片段。建立的三重PCR方法特异地鉴定牛肉及其制品中掺假猪和鸭源性成分,对打击食品掺假伪造、审核食品标签、保障消费者知情权、维护消费者健康等方面有重要作用。 展开更多
关键词 肉制品 DNA CTAB法 多重PCR 动物源性
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叶片直接PCR法在玉米转基因快速检测中的应用 认领 引用 被引量：4
15
作者 赵冰兵 任雯 +3 位作者 周秒依 李韩帅 刘亚 白琪林 《山西农业科学》 2019年第4期497-500,共4页
采用直接PCR方法跳过DNA提取步骤直接对小块玉米植株叶片进行转基因检测,并设计出针对转基因玉米叶片进行直接PCR及多重PCR的事件特异性检测体系和程序,从而极大简化了检测步骤,大大缩短了检测时长。通过对CC-2和2A-5转基因玉米及复合... 采用直接PCR方法跳过DNA提取步骤直接对小块玉米植株叶片进行转基因检测,并设计出针对转基因玉米叶片进行直接PCR及多重PCR的事件特异性检测体系和程序,从而极大简化了检测步骤,大大缩短了检测时长。通过对CC-2和2A-5转基因玉米及复合转基因玉米检测待测样品叶片进行直接PCR检测后发现,该直接PCR检测方法获得的PCR检测结果准确、可靠,适用于多样品玉米叶片转基因植株的快速鉴定。 展开更多
关键词 转基因玉米 叶片PCR 直接多重PCR法 转基因玉米检测
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猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒猪Delta冠状病毒和猪轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：18
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作者 王睿敏 施开创 +5 位作者 黎宗强 尹彦文 谢守玉 莫胜兰 陆文俊 屈素洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期190-198,共9页
针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp)。经过对... 针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪Delta冠状病毒(PDCoV)和猪轮状病毒(PRoV)基因序列,分别设计特异性引物,扩增PEDV N基因(750 bp)、TGEV M基因(544 bp)、PDCoV N基因(183 bp)和PRoV VP6基因(329 bp)。经过对引物浓度、退火温度等反应条件的优化及特异性、敏感性、重复性试验,成功建立了快速鉴别检测PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的多重RT-PCR方法。该方法仅对PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV检测为阳性,对口蹄疫病毒(FMDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪细小病毒(PPV)等主要病毒的扩增均为阴性。PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV重组质粒标准品的检出下限分别为1.57×10~2、1.57×10~3、1.57×10~2、1.57×10~2copies/L。相同条件下的重复性试验获得均匀一致的结果。应用所建立的方法检测2017—2018年采集自广西各地的270份腹泻病料,结果显示,PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的阳性率分别为15.56%、11.48%、10.74%、1.85%,并且存在混合感染现象。上述结果表明,所建立的多重RT-PCR方法可用于PEDV、TGEV、PDCoV、PRoV的快速鉴别检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪Delta冠状病毒 猪轮状病毒 多重RT-PCR 检测方法
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同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用 认领 引用 被引量：12
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作者 施开创 莫胜兰 +3 位作者 张步娴 屈素洁 赵日浪 钟诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期810-814,共5页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物,即第1对通用引物扩增美洲型和欧洲型病毒株ORF7基因(433 bp/398 bp)、第2对引物扩增美洲型经典病毒株和高致病性变异株(HP-PRRSV)Nsp2基因(338 bp/248 bp)、第3对引物扩增欧洲型病毒株ORF5基因(614 bp)。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分美洲型经典病毒株、HP-PRRSV株以及欧洲型病毒株的多重RT-PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因,其重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝;而与猪的其它重要病原均无交叉反应。应用该方法检测176份临床疑似病料样品,结果 PRRSV阳性45份,其中美洲型变异病毒株41份、经典病毒株4份,未检测到欧洲型病毒株。表明本研究建立的多重RT-PCR检测方法可以用于PRRSV的快速鉴别诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型病毒株 欧洲型病毒株 多重RT.PCR 检测方法
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实验动物皮肤病原真菌多重PCR检测方法的建立与初步应用 认领 引用 被引量：3
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作者 邢进 冯育芳 +1 位作者 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期65-70,共6页
目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、... 目的建立石膏样毛癣菌(Tm)、石膏样小孢子菌(Mg)、犬小孢子菌(Mc)和猴类毛癣菌(Am)的多重PCR检测方法,用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S-28S rRNA序列设计特异性引物,通过引物、d NTP、Taq DNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化,建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后,对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌,产生192 bp(Tm)、460 bp(Mg)、290 bp(Mc)和602 bp(As)的目的片段,最低检测限分别为5.9 pg/μL、6.6 pg/μL、9.5 pg/μL和5.1 pg/μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确,260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测,具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 皮肤病原真菌 多重PCR 检测方法 实验动物
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使用多重PCR检测奶牛乳房炎乳汁中的病原菌 认领 引用 被引量：2
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作者 张玉龙 左之才 +5 位作者 王宇 崔耀成 李志强 姚彩霞 黄赞恒 才冬杰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第11期38-43,共6页
本试验运用多重PCR检测技术检测奶牛乳房炎乳汁中的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)3种病原菌,确认该方法在乳汁病原菌检测中的适用性和有效性,并探... 本试验运用多重PCR检测技术检测奶牛乳房炎乳汁中的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)3种病原菌,确认该方法在乳汁病原菌检测中的适用性和有效性,并探讨病原菌的感染情况。选取四川奶牛场送检的191份奶样(经过加州乳房炎检测法检测,其中16份为正常奶样,64份为隐性乳房炎奶样,111份为临床型乳房炎奶样),分别进行多重PCR法和传统细菌学培养法检测,并对照和分析2种方法的差异。结果显示,多重PCR检测法检出135株致病菌,检出率为70.7%;传统细菌学培养法检出99株致病菌,检出率为51.8%;通过卡方分析证明2种检测方法的检出率差异显著(P<0.05)。鉴于多重PCR法表现出较强的特异性、灵敏度,且操作方便,非常适用于3种混合感染病原菌在奶牛临床型乳房炎、隐性乳房炎奶样的检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 病原菌 传统细菌学培养法 多重PCR法
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PEDV、TGEV和PRoV多重RT-PCR检测方法的建立及应用 认领 引用 被引量：10
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作者 龙飞翔 施开创 +3 位作者 张珍 尹彦文 陈汉忠 莫胜兰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2518-2526,共9页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)及猪轮状病毒(PRoV)的快速鉴别检测方法,本试验针对PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计3对特异性引物PEDV-N、TGEV-M和PRoV-VP6,分别扩增PEDV N基因、TGEV M基因和PRoV VP6基因... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)及猪轮状病毒(PRoV)的快速鉴别检测方法,本试验针对PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计3对特异性引物PEDV-N、TGEV-M和PRoV-VP6,分别扩增PEDV N基因、TGEV M基因和PRoV VP6基因。经优化反应条件,成功建立了能同时检测并区分PEDV、TGEV、PRoV的多重RT-PCR方法。该方法可特异扩增PEDV、TGEV、PRoV相应的基因片段,而与猪瘟病毒(CSFV)、猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;对PEDV、TGEV、PRoV基因重组质粒标准品的检出限分别为1.41×103、1.41×102和1.41×103拷贝/μL;在相同条件下重复试验可获得一致的结果。应用该方法对临床采集的190份腹泻病料进行检测,结果PEDV阳性42份,阳性率22.11%;TGEV阳性58份,阳性率30.53%;PRoV阳性34份,阳性率17.89%,且存在不同病毒混合感染的现象。结果表明,所建立的多重RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,可用于PEDV、TGEV和PRoV的临床检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 多重RT-PCR 检测方法
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