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A simple and efficient in situ RT-PCR method for detecting gene expression in specific cells of tea plant(Camellia sinensis)root 认领 引用
1
作者 Shijia Lin Xiaohan Hu +2 位作者 Zhaoliang Zhang Xiaochun Wan Shupei Zhang 《Beverage Plant Research》 CAS 2025年第1期381-386,共6页
Currently,the field of tea plant biology is rapidly advancing,with numerous significant scientific inquiries being raised and investigated.Meanwhile,a substantial number of functional genes have been reported.However,... Currently,the field of tea plant biology is rapidly advancing,with numerous significant scientific inquiries being raised and investigated.Meanwhile,a substantial number of functional genes have been reported.However,due to the lack of certain in vivo validation techniques,much of the expression information for these functional genes is at the tissue level in tea plants and remains unclear at the cell-type level.In this study,an in situ PCR method for detecting gene expression heterogeneity in tea plant root cells is presented.A detailed description of the procedure and precautions involved in this method is provided and suggestions offered for addressing potential experimental challenges.Finally,the expression patterns of CsGL3,CsCAT2,and CsAAP4 in tea plant root cells were taken as examples.The present results showed that CsGL3 was predominantly expressed in root epidermal cells,while CsCAT2 shows strong expression in pericycle and cortex.The expression of CsAAP4 was not detected in root cells.These findings are consistent with previous reports,indicating that this method is feasible for the detection of gene expression patterns in tea plant root cells. 展开更多
关键词 detecting gene expression heterogeneity functional genes tea plants situ pcr method situ RT PCR gene expression vivo validation techniquesmuch
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GPV,GPMV,GoCV多重实时荧光定量PCR检测方法研究 认领 引用 被引量：2
2
作者 刘久源 辛鹏 +2 位作者 刘贤琳 王艺威 董浩 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期165-172,共8页
为快速精准判断吉林省内鹅细小病毒(GPV)、鹅副黏病毒(GPMV)和鹅圆环病毒(GoCV)的流行情况,以Taqman荧光定量PCR检测技术为基础,分别以VP3、F和Rep复制区为靶基因,设计3组不同的特异性引物和探针,建立能够同时检测3种常见雏鹅易感病毒... 为快速精准判断吉林省内鹅细小病毒(GPV)、鹅副黏病毒(GPMV)和鹅圆环病毒(GoCV)的流行情况,以Taqman荧光定量PCR检测技术为基础,分别以VP3、F和Rep复制区为靶基因,设计3组不同的特异性引物和探针,建立能够同时检测3种常见雏鹅易感病毒的检测方法。结果表明:建立的多重荧光定量检测方法仅对鹅细小病毒、鹅圆环病毒和鹅副黏病毒存在特异性扩增,与其他鹅类病毒或常见病原不存在交叉反应;最低检测限分别为6.59×101,5.57×101,4.89×101copies/μL,相较常规PCR灵敏性分别高103倍,102倍和102倍,且重复性较好,组间和组内变异系数均<2%。对50份样本进行检测,多重荧光定量PCR分别检测出4份GPV,2份GPMV,12份GoCV,GPV与GoCV混合感染1份,结果与常规PCR检测一致。建立的检测方法能够同时检测GPV,GPMV和GoCV 3种鹅类病毒,且检测效率较高,能够为3种鹅类易感病毒疫情的早期防控提供可靠技术支持。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 鹅副黏病毒 鹅圆环病毒 荧光定量PCR 探针法
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细胞种属鉴别多重PCR法的优化及验证 认领 引用
3
作者 吴雪伶 张琪梦 +5 位作者 纳涛 魏山山 范珊珊 宗伟英 孟淑芳 杨志行 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2026年第2期180-188,共9页
目的对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证,使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量... 目的对原有细胞种属鉴别多重PCR法进行再优化以及再验证,使其可适用于不同检测机构及实验室的检测。方法对猪、中国仓鼠、非洲绿猴和大鼠的引物序列及核酸提取方式、引物配比、参比细胞混合基因组DNA的配比、PCR扩增程序及DNA模板用量进行优化,对优化后的方法进行灵敏度、交叉污染检测限度及不同实验室间的复核验证。结果优化后的方法可成功用于10个种属的细胞鉴别检测,方法灵敏度可达50~5000个细胞,交叉污染的检测水平可达1∶100~1∶10000,4家不同实验室均能利用该方法成功对细胞进行检测。结论优化后的细胞种属鉴别多重PCR法具有较好的专属性及检测细胞交叉污染的能力,可用于不同实验室的细胞种属鉴别检测,耐用性好,将为生产及检定用细胞的质量控制提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 细胞种属 鉴别 多重PCR法 线粒体
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基于HSP90基因的羊吕氏泰勒虫PCR检测方法的建立与评价 认领 引用
4
作者 翟斌涛 郑红飞 +5 位作者 李甲 包碧波 孙万奎 王义军 王耀东 张继瑜 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2026年第3期85-90,共6页
吕氏泰勒虫是一种严重危害养羊业的血液原虫,建立快速、准确的检测方法对其防控至关重要。为开发一种以羊吕氏泰勒虫热休克蛋白90基因(HSP90)为新靶标的PCR检测方法,本研究根据吕氏泰勒虫HSP90基因序列设计特异性引物,通过梯度PCR优化... 吕氏泰勒虫是一种严重危害养羊业的血液原虫,建立快速、准确的检测方法对其防控至关重要。为开发一种以羊吕氏泰勒虫热休克蛋白90基因(HSP90)为新靶标的PCR检测方法,本研究根据吕氏泰勒虫HSP90基因序列设计特异性引物,通过梯度PCR优化反应条件,并对方法的敏感性、特异性和重复性进行系统评价。结果表明,本研究建立的PCR检测方法的最佳退火温度为60.5℃,退火时间为30 s。对该方法进行的性能评价结果表明,其敏感性高,最低可检测到32.4 pg/μL的基因组DNA(敏感性较18S rRNA靶标提高了3倍以上);特异性强,与豆状囊尾蚴、多房棘球蚴、弓形虫及球虫的DNA均无交叉反应;重复性好,在不同批次和批内试验中结果稳定。对现场采集的羊血液样品的检测结果表明,18份样品的阳性检出率为27.78%,测序结果表明扩增产物为吕氏泰勒虫。本研究成功建立了基于HSP90基因的羊吕氏泰勒虫PCR检测方法。该方法具有高效、灵敏、特异和可靠的优点,不仅为吕氏泰勒虫的流行病学调查和精准诊断提供了新的有效工具,而且由于HSP90在泰勒虫应激生存和致病中的关键作用,本研究也为后续探索其基因功能、开发靶向药物奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 羊 吕氏泰勒虫 HSP90基因 PCR 检测方法
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机场道面承载能力ACR-PCR评价方法及其改进方向 认领 引用
5
作者 袁捷 李杰 +2 位作者 马鲁宽 凌建明 姜昌山 《同济大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2026年第2期255-263,共9页
道面承载能力评价是保障飞机安全运行的重要工作之一。在回顾飞机分类号-道面分类号(aircraft classification number-pavement classification number,ACN-PCN)评价方法基本原理并总结其局限性的基础上,阐述了飞机分类等级-道面分类等... 道面承载能力评价是保障飞机安全运行的重要工作之一。在回顾飞机分类号-道面分类号(aircraft classification number-pavement classification number,ACN-PCN)评价方法基本原理并总结其局限性的基础上,阐述了飞机分类等级-道面分类等级(aircraft classification rating-pavement classification rating,ACR-PCR)评价方法的优化内容;明确了ACR和PCR的计算方法,并通过算例对比分析了2种方法,同时提出了改进方向。结果表明,ACR-PCR评价方法优化了标准道面结构、当量单轮胎压等参数,更新了道面结构破坏模式的控制准则及力学响应计算方法,实现了与现行设计方法的统一;ACR值不能简单地用10倍的ACN值表示,并且ACR-PCR评价方法对刚性道面承载能力提出了更高要求;建议在优化标准结构的基础上,提出针对无机结合料稳定类基层道面的ACR计算方法以及刚性道面上加铺层复合道面承载能力ACR-PCR评价方法。 展开更多
关键词 机场工程 机场道面 承载能力 ACR-PCR评价方法
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3种骨舌鱼三重荧光PCR检测方法的建立 认领 引用
6
作者 耿庆华 万超 +4 位作者 刘建丽 啜微微 杨爱馥 白子龙 蒲静 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2026年第4期623-631,共9页
为了给口岸提供更准确和快速的鉴定美丽硬仆骨舌鱼、双须骨舌鱼、巨骨舌鱼等3种骨舌鱼的检测方法,通过比对分析3种鱼及近缘物种的COⅠ和16S rRNA基因序列,设计筛选了3套特异性引物和探针,通过对引物、探针的浓度以及反应体系等条件的优... 为了给口岸提供更准确和快速的鉴定美丽硬仆骨舌鱼、双须骨舌鱼、巨骨舌鱼等3种骨舌鱼的检测方法,通过比对分析3种鱼及近缘物种的COⅠ和16S rRNA基因序列,设计筛选了3套特异性引物和探针,通过对引物、探针的浓度以及反应体系等条件的优化,建立了可以同时检测鉴别3种骨舌鱼的多重荧光PCR检测方法,并分别对该方法的灵敏度、重复性、稳定性和特异性进行了评价。结果显示:该方法对美丽硬仆骨舌鱼(3.789×10-6 ng/μL)、双须骨舌鱼(5.393×10^(-6 ) ng/μL)和巨骨舌鱼(4.229×10^(-6 ) ng/μL)最低检测限均可达到1×10^(-6 ) ng/μL;检测3种鱼方法的标准曲线相对系数r2均大于0.99,表明线性关系良好。批内重复试验变异系数为0.53%~0.59%,批间重复试验变异系数为0.26%~0.48%,均在2%以下;对口岸进境的13种形态相近和常见的观赏鱼进行特异性检测,结果均无交叉反应。另外,对来自观赏鱼养殖场和交易市场采集的58份观赏鱼样品以及来自印度尼西亚、泰国等国的37份进境观赏鱼进行鉴定,结果符合率为100%。以上结果表明,本研究建立的方法灵敏度高、特异性强、稳定性强,可以用于口岸进出境观赏鱼的检测鉴别。 展开更多
关键词 美丽硬仆骨舌鱼 双须骨舌鱼 巨骨舌鱼 三重荧光PCR 检测方法
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基孔肯雅病毒通用型实时荧光RT-PCR检测方法的建立及应用 认领 引用
7
作者 吴甜甜 戴俊 +10 位作者 师永霞 郑夔 孙芳芳 张璐 蔡扬尧 唐海秀 曾华颖 程燕 王锦彤 戴智萍 麦芷茵 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2026年第5期627-632,共6页
目的建立一种能够快速、特异检测所有谱系基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)的通用型实时荧光RT-PCR方法。方法针对CHIKV主要谱系[亚洲型、东/中/南非型(中非分支)、东/中/南非型(印度洋分支)以及西非型],设计并合成特异性引物与Ta... 目的建立一种能够快速、特异检测所有谱系基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)的通用型实时荧光RT-PCR方法。方法针对CHIKV主要谱系[亚洲型、东/中/南非型(中非分支)、东/中/南非型(印度洋分支)以及西非型],设计并合成特异性引物与TaqMan探针,建立实时荧光RT-PCR检测体系。对该方法的特异性、重复性、再现性及检测限进行系统评估验证。最后,应用所建立的方法对临床样本进行验证检测。结果成功构建了一种覆盖CHIKV全谱系的实时荧光RT-PCR检测方法,该方法对3种主要谱系CHIKV的检测灵敏度均达到200 copies/mL;重复性检测的变异系数分别为1.51%、0.95%、0.97%和0.69%,再现性检测的变异系数分别为0.76%、1.57%、1.07%和1.08%,表明其具有优异的重复性与再现性。特异性试验显示,该方法对登革病毒(DENV-1~DENV-4)、寨卡病毒和黄热病毒基因均无交叉反应,特异性良好。在1740份临床样本检测中,检出基孔肯雅病毒阳性24份,检出率为100%(24/24),Ct值为18~35;在其余1716份非基孔肯雅病毒阳性样本(包括64份登革病毒阳性、76份疟原虫阳性及1576份其他阴性样本)中,未检出假阳性,显示出优异的临床灵敏度和特异度。结论本研究建立的实时荧光RT-PCR方法能够实现CHIKV的快速、灵敏与特异性检测,适用于CHIKV感染的早期临床诊断。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 实时荧光RT-PCR 通用型 重复性 再现性
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基于微滴式数字PCR技术检测番茄褐色皱纹果病毒方法的建立与评价 认领 引用
8
作者 华明艳 宋兰芳 +4 位作者 付成龙 崔少杰 孙海波 靳力争 金凤媚 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2026年第5期929-939,共11页
番茄褐色皱纹果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)病作为威胁全球番茄产业的重要病害,具有早期无症状、传播速度快、危害程度重等特点。为建立ToBRFV的高效精准检测方法、实现番茄褐色皱纹果病毒病的有效防控,本研究通过设... 番茄褐色皱纹果病毒(Tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)病作为威胁全球番茄产业的重要病害,具有早期无症状、传播速度快、危害程度重等特点。为建立ToBRFV的高效精准检测方法、实现番茄褐色皱纹果病毒病的有效防控,本研究通过设计ToBRFV CP基因保守区域特异性引物,构建质粒标准品,建立基于微滴式数字PCR(ddPCR)的ToBRFV检测方法(ddPCR法),并将ddPCR法与实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法进行系统比较。结果表明,ddPCR法对ToBRFV的检测下限为1μL 1.9×100拷贝,而qPCR方法对ToBRFV的检测下限为1μL 1.9×102拷贝,且ddPCR法仅对ToBRFV呈现阳性扩增,而对番茄花叶病毒(ToMV)、烟草花叶病毒(TMV)、番茄斑萎病毒(TSWV)等田间常见病毒无交叉反应。基于ddPCR方法对30份田间疑似感染ToBRFV的样本进行检测,阳性检出率达93.3%,显著高于qPCR方法的76.7%。综上,本研究建立的ddPCR检测方法在ToBRFV早期诊断、低载毒量样本检测及田间精准筛查中表现出检测下限低、特异性强和漏检风险低等优势,可有效应用于ToBRFV的流行监测,为ToBRFV的科学防控及番茄产业健康发展提供技术支撑。 展开更多
关键词 番茄褐色皱纹果病毒 微滴式数字PCR 检测方法 灵敏度
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一株水禽细小病毒的分离鉴定及其荧光定量PCR检测方法的建立 认领 引用
9
作者 张成成 吴建强 +5 位作者 宋静静 刁梦晗 郭梦娇 薄宗义 张小荣 吴艳涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第5期2966-2971,共6页
旨在研究水禽细小病毒(waterfowl parvovirus,WPV)的遗传多样性和关键变异,进而建立快速核酸检测方法,用于临床样本的早期诊断和病毒防控。通过番鸭胚分离到WPV毒株,经全基因组分析,建立了SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。遗传分析表... 旨在研究水禽细小病毒(waterfowl parvovirus,WPV)的遗传多样性和关键变异,进而建立快速核酸检测方法,用于临床样本的早期诊断和病毒防控。通过番鸭胚分离到WPV毒株,经全基因组分析,建立了SYBR Green I荧光定量PCR检测方法。遗传分析表明,该分离株与安徽DY16株亲缘关系最近,且其NS与VP蛋白存在多个关键氨基酸突变。所建立的荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强。综上,本研究成功分离到一株水禽细小病毒,建立的快速核酸检测方法适用于临床早期诊断与大规模筛查。 展开更多
关键词 水禽细小病毒 全基因组分析 SYBR Green I荧光定量 检测方法
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欧亚类禽H1亚型猪流感病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立 认领 引用
10
作者 王飞飞 黄凯伦 +5 位作者 宋祖晨 田昌海 杨焕良 乔传玲 陈化兰 陈艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第2期139-144,共6页
为建立欧亚类禽H1亚型猪流感病毒(EA H1N1 SIV)的快速检测方法,本研究根据EA H1N1 SIV HA基因保守区序列,采用Primer5.0软件设计特异性引物和探针,采用矩阵法优化各反应条件后建立了检测EA H1N1 SIV的荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法。采... 为建立欧亚类禽H1亚型猪流感病毒(EA H1N1 SIV)的快速检测方法,本研究根据EA H1N1 SIV HA基因保守区序列,采用Primer5.0软件设计特异性引物和探针,采用矩阵法优化各反应条件后建立了检测EA H1N1 SIV的荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法。采用本研究建立的Taq Man RT-qPCR方法分别检测EA H1N1 SIV、甲型H1亚型SIV、经典型H1亚型SIV、H3亚型SIV、猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒,评估该方法的特异性;以1×10~2拷贝/μL~1×10~8拷贝/μL的质粒标准品p MD18-T-HA作为模板,采用本研究建立RT-qPCR扩增,评估该方法的敏感性;分别以1×10~3拷贝/μL~1×10~5拷贝/μL的质粒标准品作为模板,利用该RT-qPCR方法在同一时间和不同时间检测,进行重复性试验,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能检测到EA H1N1SIV,其他猪常见病毒均为阴性;对重组质粒标准品的检测限为1×10~2拷贝/μL;批内和批间重复性试验的变异系数CV值均小于5%。采用该RT-qPCR方法及常规病毒分离鉴定方法同时检测100份临床阴性猪鼻拭子样品和130份病毒分离鉴定为EA H1N1 SIV阳性的猪鼻拭子临床样品。结果显示该RT-qPCR方法对130份猪鼻拭子阳性样品均检测为阳性,对100份临床样品均检测为阴性,与病毒分离鉴定方法的符合率达100%,上述结果表明,本研究建立的Taq Man RTqPCR方法特异性强、敏感性高、重复性与稳定性较好,为EA H1N1 SIV临床样品的检测及流行病学调查提供快速便捷的技术支持。 展开更多
关键词 欧亚类禽H1亚型猪流感病毒 荧光定量RT-PCR 检测方法
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马链球菌马亚种PCR和荧光定量PCR方法的建立及应用 认领 引用
11
作者 张风荣 郁蕾 +5 位作者 朱晓旻 薛俊欣 陈翔 陈梦洁 王艳 赵光伟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2026年第3期115-121,共7页
为建立马链球菌马亚种(Streptococcus equi subspecies equi,SEE)快速检测方法,本试验根据ICESe2基因(CP134538.1)的保守序列,设计特异性引物和荧光定量PCR探针,分别建立SEE的普通PCR和TaqMan荧光定量PCR检测方法并对临床样本进行检测... 为建立马链球菌马亚种(Streptococcus equi subspecies equi,SEE)快速检测方法,本试验根据ICESe2基因(CP134538.1)的保守序列,设计特异性引物和荧光定量PCR探针,分别建立SEE的普通PCR和TaqMan荧光定量PCR检测方法并对临床样本进行检测应用。结果显示普通PCR和荧光定量PCR的检测下限分别为600 copies/μL和60 copies/μL,两种检测方法对类鼻疽、马病毒性动脉炎、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型、西尼罗核酸、马链球菌兽疫亚种核酸均为阴性,显示特异性良好;利用所建立方法对100份入境马匹样品进行检测,结果均为阴性,与细菌分离结果一致。综上,本试验建立的两种检测方法均具有良好的敏感性和特异性,可为马链球菌马亚种临床检测、流行病学调查及防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 马链球菌马亚种 PCR 荧光PCR 检测方法 灵敏度 特异性
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内罗毕羊病病毒巢式PCR检测方法的建立及初步应用 认领 引用
12
作者 邵建伟 廉春杨 姚鑫炎 《佛山科学技术学院学报（自然科学版）》 CAS 2026年第3期1-6,共6页
内罗毕羊病病毒(Nairobi sheep disease virus,NSDV)主要感染绵羊和山羊,并引发内罗毕羊病(Nairobi sheep disease,NSD),临床表现为高热、急性出血性胃肠炎、流产等症状,致死率高达90%,对养羊业的健康发展造成巨大威胁。为建立针对NSDV... 内罗毕羊病病毒(Nairobi sheep disease virus,NSDV)主要感染绵羊和山羊,并引发内罗毕羊病(Nairobi sheep disease,NSD),临床表现为高热、急性出血性胃肠炎、流产等症状,致死率高达90%,对养羊业的健康发展造成巨大威胁。为建立针对NSDV的巢式PCR检测方法,以高通量测序为NSDV阳性样本核酸的L基因序列为靶标,设计特异性的巢式PCR扩增引物,通过对扩增条件的优化及灵敏性、特异性的检验,并对经高通量测序确认的10份NSDV阳性样本核酸进行验证。结果显示,建立针对NSDV的巢式PCR检测方法可扩增出特异性的目的片段,且与其他羊源病原体无扩增反应,最低检出限度为3.7×101copies/μL。对10份NSDV阳性核酸进行扩增、测序及比对分析后,确定为NSDV感染,证明建立的巢式PCR检测方法具有一定的可靠性和准确性,可用于NSDV临床样本的检测。 展开更多
关键词 内罗毕羊病病毒 巢式PCR 检测方法 应用
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猪圆环病毒2型微滴数字PCR检测方法的建立及临床应用 认领 引用
13
作者 刘武函 唐小明 +8 位作者 彭志 张坤 谢怡灵 范仲鑫 王卫国 尚玲 张梦凡 杨青 胡巧云 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2026年第1期120-125,共6页
为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法... 为建立一种特异性强、敏感性高、重复性好的猪圆环病毒2型(PCV-2)微滴数字PCR检测方法,试验基于PCV-2 ORF1保守区域设计引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度及特异性、敏感性和重复性试验建立微滴数字PCR方法,并采用该方法对90份临床样本进行检测。结果表明:建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法的最佳引物和探针浓度分别为18μmol/L和9μmol/L,退火温度为61℃;能特异性检出PCV-2,与多种常见猪病原[猪圆环病毒3型(PCV-3)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、非洲猪瘟病毒(ASFV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)]无交叉反应;最低检测限为3.48 copies/μL;重复性试验中扩增后的拷贝数组内与组间变异系数范围分别在0.91%~6.13%和1.44%~8.53%之间,均小于10%。90份临床样本中,建立的微滴数字PCR方法检出PCV-2阳性样本43份,检出率为47.78%,经统计微滴数字PCR方法检出的阳性样本包含了实时荧光定量PCR方法检出的所有阳性样本,与实时荧光定量PCR方法的符合率为88.89%。说明本研究建立的PCV-2微滴数字PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适用于临床样本(特别是低病毒载量样本)的检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 微滴数字PCR 病毒检测 检测方法 特异性试验 敏感性试验 重复性试验
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基于超星学习通的生物技术制药课程PCR专题BOPPPS教学实践 认领 引用
14
作者 刘广娜 王晓岩 杨松 《安徽农学通报》 2026年第1期118-121,共4页
为解决生物技术制药课程中PCR技术原理复杂、操作精细导致的教学难题,本文将BOPPPS教学法与超星学习通平台深度融合,构建PCR专题教学模式。该模式遵循引入、目标、前测、参与式学习、后测、总结6个环节逻辑,通过案例驱动、问题导向激发... 为解决生物技术制药课程中PCR技术原理复杂、操作精细导致的教学难题,本文将BOPPPS教学法与超星学习通平台深度融合,构建PCR专题教学模式。该模式遵循引入、目标、前测、参与式学习、后测、总结6个环节逻辑,通过案例驱动、问题导向激发学习兴趣,以精准前测优化教学靶向,依托小组汇报、实验实操、互动讨论强化参与式学习,结合多元化评价保障教学效果。教学实践显示,该模式有效提升了214名学生的PCR理论知识掌握度(基本原理单选题正确率达94.4%)、实验操作规范性及综合素养(团队协作、创新思维);同时促进教师从经验型备课转向精准化设计,教研融合能力明显提升,获得学校督导A级(教学效果优秀)及学生评教97.79分的高度认可。研究表明,BOPPPS教学法与学习通平台的融合应用对生物技术制药课程PCR教学具有显著成效,后续需通过优化时间管理、增设案例研讨、强化个性化支持进一步完善。本文可为多学科交叉的综合性课程教学改革提供参考。 展开更多
关键词 BOPPPS教学法 生物技术制药 PCR 教学设计
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犊牛腹泻主要病原菌四重实时荧光定量PCR检测方法的建立 认领 引用 被引量：1
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作者 孙佳琪 吴浩 +4 位作者 刘梦瑶 王朋朋 吴彤 王爽 吴文学 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2026年第5期51-58,共8页
为了进行犊牛细菌性腹泻病的快速诊断和流行病学防控,本试验将大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌和副结核分枝杆菌4种病原菌的特异性靶基因保守序列作为检测靶标,分别设计了4对特异性引物和小沟结合物(MGB)-TaqMan探针,构建重组阳性质粒,... 为了进行犊牛细菌性腹泻病的快速诊断和流行病学防控,本试验将大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌和副结核分枝杆菌4种病原菌的特异性靶基因保守序列作为检测靶标,分别设计了4对特异性引物和小沟结合物(MGB)-TaqMan探针,构建重组阳性质粒,建立了能分别检测4种病原菌的单重实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法,并对反应条件进行优化。以建立的单重qPCR检测方法为基础,确定四重qPCR的最佳反应条件,以重组阳性质粒绘制标准曲线,验证该方法的灵敏性、特异性和重复性,利用建立的方法检测临床样本,评估该方法的可行性。结果显示,成功构建4种病原菌重组阳性质粒;单重qPCR最佳退火温度为55.0℃,最佳退火时间为60 s;大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌和副结核分枝杆菌的单重qPCR最佳引物浓度分别为200、300、200和200 nmol/L,最佳探针浓度分别为300、300、200和200 nmol/L;四重qPCR最佳引物浓度分别为200、100、100和200 nmol/L,最佳探针浓度分别为300、100、100和200 nmol/L。本方法检测大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌和副结核分枝杆菌重组阳性质粒的灵敏性分别为100、100、101和100copies/μL,灵敏性较高;建立方法仅可特异性检测靶病原,而未检测到其他病原,特异性良好;批内和批间变异系数均小于10%,重复性较好。临床样本检测结果显示,建立的四重qPCR方法对大肠杆菌和副结核分枝杆菌的检出率均高于PCR方法。结果表明,本试验建立的同时检测4种病原菌的四重qPCR方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于大肠杆菌、沙门菌、产气荚膜梭菌和副结核分枝杆菌的鉴别诊断,可为犊牛腹泻病的早期诊断和防控提供良好的技术支持。 展开更多
关键词 大肠杆菌 沙门菌 产气荚膜梭菌 副结核分枝杆菌 四重实时荧光定量PCR 检测方法
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RNaseH依赖性PCR扩增结合熔解曲线法鉴别培植牛黄与体外培育牛黄 认领 引用 被引量：1
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作者 陈小艳 覃桂 +3 位作者 向温萍 陈明龙 刘红 汪波 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2026年第3期695-705,共11页
目的 运用核糖核酸酶H依赖性PCR扩增结合熔解曲线分析(rhPCR-HRM)技术,实现培植牛黄与体外培育牛黄的快速鉴别。方法 基于牛与猪物种间线粒体COI基因序列的差异,设计特异性rhPCRHRM引物,通过rhPCR扩增反应,依据扩增产物的熔解温度(Tm... 目的 运用核糖核酸酶H依赖性PCR扩增结合熔解曲线分析(rhPCR-HRM)技术,实现培植牛黄与体外培育牛黄的快速鉴别。方法 基于牛与猪物种间线粒体COI基因序列的差异,设计特异性rhPCRHRM引物,通过rhPCR扩增反应,依据扩增产物的熔解温度(Tm)值差异进行鉴别,评估引物的特异性,优化反应条件,并考察该方法的灵敏度与实际应用适应性。结果 本研究设计的引物展现了优异的特异性,能够区分牛源性和猪源性样本,其扩增产物分别呈现出单一特异性熔解曲线峰,对应的Tm值分别为(83.93±0.2)和(79.15±0.2)℃;此外,该检测方法具有高灵敏度,能够检测低至0.05 ng的DNA模板。对44份市场收集的药材样本进行检测后发现,在30份标示为培植牛黄的样本中,仅有7份符合培植牛黄特征,其余23份实为体外培育牛黄;而14份标示为体外培育牛黄的样本均被确证。结论 本研究建立的rhPCR-HRM方法能够有效区分培植牛黄与体外培育牛黄,具备较高的特异性和灵敏度,为牛黄真伪鉴定提供了新方法,并为市场监管提供了有力的技术支撑。 展开更多
关键词 RNaseH依赖性PCR 熔解曲线法 培植牛黄 体外培育牛黄 鉴别
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粘液乳杆菌属实时荧光PCR检测方法建立 认领 引用
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作者 邢雨迪 张晓波 +7 位作者 郑秋月 方慧婷 何剑 王旭 德莎茹娜 裴晓燕 王伟 朴永哲 《食品与发酵工业》 EI CAS CSCD 北大核心 2026年第8期353-359,I0030,共7页
食品用菌种粘液乳杆菌属主要包括发酵粘液乳杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌。基于可食用菌种快速、准确鉴定的需求,该文开发了粘液乳杆菌属菌种的实时荧光PCR(qPCR)检验方法。基于发酵粘液乳杆菌dnaJ基因和罗伊氏粘液乳杆菌groL基因,设计特异... 食品用菌种粘液乳杆菌属主要包括发酵粘液乳杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌。基于可食用菌种快速、准确鉴定的需求,该文开发了粘液乳杆菌属菌种的实时荧光PCR(qPCR)检验方法。基于发酵粘液乳杆菌dnaJ基因和罗伊氏粘液乳杆菌groL基因,设计特异性引物和探针。同时收集了33株乳酸菌、芽孢菌及其他菌种作为交叉反应的阴性菌株,实验结果表明该文设计的引物和探针对其他菌种没有交叉反应。发酵粘液乳杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌qPCR方法的扩增效率(E)分别为87.9%和95.6%,LOD95%值分别为1.91×102、5.33×102 pg/μL。为了验证方法的适用性,采用qPCR方法从食品样品中分离鉴定发酵粘液乳杆菌和罗伊氏粘液乳杆菌,同时采用16S rRNA基因测序,验证了2种方法鉴定菌种的一致性。针对食品样品,该文基于SYBR Green qPCR方法对5株发酵粘液乳杆菌分离株和4株罗伊氏粘液乳杆菌分离株的5种抗生素耐药基因进行了检测,发现四环素类tetA耐药基因检出率较高,提示存在食品安全隐患。实验结果表明,该文建立的qPCR方法适用于粘液乳杆菌属菌种鉴定,特异性好,扩增效率和灵敏度高。 展开更多
关键词 发酵粘液乳杆菌 罗伊氏粘液乳杆菌 实时荧光PCR方法 16S rRNA基因测序 菌种鉴定
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鉴别BVDV-1、BEV、BRV-A、BCoV的四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立及应用 认领 引用
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作者 焦迪 王瑞 +8 位作者 贾皓 张晓倩 崔强 王海艳 陈林军 延涵 罗晓平 李军燕 赵治国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第3期520-527,共8页
为了对牛腹泻病进行快速鉴别诊断,本研究根据牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)的5′-UTR基因、牛肠道病毒(BEV)的5′-UTR基因、牛轮状病毒A型(BRV-A)的VP6基因、牛冠状病毒(BCoV)的N基因保守区,设计了特异性引物与探针,通过优化建立了同时检... 为了对牛腹泻病进行快速鉴别诊断,本研究根据牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)的5′-UTR基因、牛肠道病毒(BEV)的5′-UTR基因、牛轮状病毒A型(BRV-A)的VP6基因、牛冠状病毒(BCoV)的N基因保守区,设计了特异性引物与探针,通过优化建立了同时检测BVDV-1、BEV、BRV-A和BCoV的四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法具有较强的特异性;BVDV-1、BEV、BRV-A的最低检测限均可达到10~1拷贝/μL,BCoV的最低检测限为10~2拷贝/μL;批内及批间变异系数均小于1%,表明该方法重复性好;运用该方法和PCR检测方法对采自内蒙古呼伦贝尔市、通辽市的121份牛粪便样品进行检测,结果显示,BVDV-1、BEV、BRV-A、BCoV的检出率分别为6.61%、39.66%、9.91%、10.74%,检出率均高于PCR检测方法,且上述4个病原的符合率分别为99.17%、95.86%、98.34%、98.34%。结果表明,建立的四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可以用于牛腹泻病原BVDV-1、BEV、BRV-A、BCoV高通量一站式诊断。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒1型 牛肠道病毒 牛轮状病毒A型 牛冠状病毒 四重TaqMan荧光定量RT-PCR方法
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布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 认领 引用
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作者 彭海涛 高阳 +6 位作者 刘雨欣 顾德媛 张东 张如 许会会 陈思 杨艳玲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期369-377,共9页
旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBan... 旨在建立一种经济高效的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR鉴别检测方法,用于布鲁菌感染的动物及动物产品的快速检测并区分牛种布鲁菌和其他种布鲁菌感染的动物,为临床常的疫苗和研发的新型疫苗提供科学有效的鉴别诊断方法。本研究根据GenBank公布的galU和Omp31的序列设计检测引物和探针,构建重组质粒,对方法特异性、灵敏性及重复性评价,检测实验室制备和临床动物布病血清及组织样品。结果表明,成功建立了布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,该方法最低检测限为1.93×100 copies·μL-1,与其他革兰阴性菌无交叉反应,批内及批间变异系数均小于2%。利用本研究建立的方法检测实验室制备样品和临床采集样品共156份,与BCSP31-PCR相比,两者阳性符合率为69.75%;与PCR和虎红凝集试验相比,灵敏性更高,双重TaqMan荧光定量PCR的敏感性为100%,PCR的敏感性为69.75%,虎红凝集试验的敏感性为58.65%。本研究建立的布鲁菌双重TaqMan荧光定量PCR检测方法,为布鲁菌临床鉴别检测、流行病学调查及净化提供技术支持。 展开更多
关键词 布鲁菌 双重Taq Man荧光定量PCR 检测方法 鉴别诊断
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H11亚型禽流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用 认领 引用
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作者 薄纯英 田杰 +10 位作者 杨德雄 彭程 蒋文明 李金平 侯广宇 杨吉喆 周淑宁 周婉婷 李晓奇 刘朔 刘华雷 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第8期4501-4508,共8页
旨在建立一种实时荧光RT-PCR检测方法,以实现对H11亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的快速精准检测。根据GISAID公布的2020—2024年全球范围H11亚型AIV HA基因序列及本实验室常规监测检出的该亚型病毒HA基因序列,针对其跨谱... 旨在建立一种实时荧光RT-PCR检测方法,以实现对H11亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的快速精准检测。根据GISAID公布的2020—2024年全球范围H11亚型AIV HA基因序列及本实验室常规监测检出的该亚型病毒HA基因序列,针对其跨谱系的保守区域设计特异性引物和探针,优化反应条件,绘制标准曲线,对特异性、灵敏性和重复性进行评价,并采用该方法对本实验室保存的162份临床样品进行检测。结果表明,该方法特异性良好,仅H11亚型AIV出现扩增曲线,与其他亚型AIV或常见禽呼吸道病原无交叉反应;灵敏性良好,最低检测限度为1.08拷贝·μL-1;重复性较好,组内和组间变异系数均低于1%。临床样品检测结果显示,该方法与病毒分离鉴定结果一致,符合率100%。综上,本研究建立的检测方法能够为H11亚型AIV的早期监测预警与防控提供技术支撑。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H11亚型 实时荧光RT-PCR 检测方法
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