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Integrating PCR-free amplification and synergistic sensing for ultrasensitive and rapid CRISPR/Cas12a-based SARS-CoV-2 antigen detection 认领 引用 被引量：2
1
作者 Xiangxiang Zhao Zhengduo Wang +9 位作者 Bowen Yang Zilong Li Yaojun Tong Yuhai Bi Zhenghong Li Xuekui Xia Xiangyin Chen Lixin Zhang Weishan Wang Gao-Yi Tan 《Synthetic and Systems Biotechnology》 SCIE CSCD 2021年第4期283-291,共9页
Antigen detection provides particularly valuable information for medical diagnoses;however,the current detection methods are less sensitive and accurate than nucleic acid analysis.The combination of CRISPR/Cas12a and ... Antigen detection provides particularly valuable information for medical diagnoses;however,the current detection methods are less sensitive and accurate than nucleic acid analysis.The combination of CRISPR/Cas12a and aptamers provides a new detection paradigm,but sensitive sensing and stable amplification in antigen detection remain challenging.Here,we present a PCR-free multiple trigger dsDNA tandem-based signal amplification strategy and a de novo designed dual aptamer synergistic sensing strategy.Integration of these two strategies endowed the CRISPR/Cas12a and aptamer-based method with ultra-sensitive,fast,and stable antigen detection.In a demonstration of this method,the limit of detection was at the single virus level(0.17 fM,approximately two copies/μL)in SARS-CoV-2 antigen nucleocapsid protein analysis of saliva or serum samples.The entire procedure required only 20 min.Given our system’s simplicity and modular setup,we believe that it could be adapted reasonably easily for general applications in CRISPR/Cas12a-aptamer-based detection. 展开更多
关键词 CRISPR/Cas12a Aptamer Antigen detection SARS-CoV-2 PCR-Free amplification Synergistic sensing
血浆游离DNA(cfDNA)在结核病诊断中的临床价值 认领 引用
2
作者 陈颖琦 胥萍 《标记免疫分析与临床》 CAS 2026年第5期1007-1011,共5页
目的评估微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测血浆结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复合群游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)对结核病诊断的临床价值。方法选取2023~2024年苏州市第五人民医院收治的疑似结核患... 目的评估微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)技术检测血浆结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)复合群游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)对结核病诊断的临床价值。方法选取2023~2024年苏州市第五人民医院收治的疑似结核患者、其他非结核疾病患者及同期健康体检人群,依据临床诊断标准分为结核病组(164例)、非结核病组(25例)和健康对照组(10例),其中非结核病组包括非结核分枝杆菌感染7例,矽肺2例,真菌、病毒等感染性非结核病16例。运用微滴式数字PCR(ddPCR)技术检测血浆结核分枝杆菌复合群游离DNA(cfDNA)表达水平,并同时进行痰液结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(Gene Xpert MTB/RIF)、痰液涂片抗酸染色(简称涂片法)、结核分枝杆菌培养(简称培养法)及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(interferon-γrelease assay,IGRA)。通过分析5种检测方法的效能指标评估cfDNA检测技术在结核病诊断中的临床价值。结果3组受试者cfDNA水平差异具有统计学意义(P<0.001)。在结核组中,cfDNA方法的阳性检出率为51.83%,高于涂片抗酸染色(32.32%)(P<0.05)。结论血浆游离DNA(cfDNA)在结核病诊断中的灵敏度显著优于传统涂片法,与基于核酸扩增技术的Gene Xpert及“金标准”培养法检测阳性率相当,与TB-IGRA联合检测优势明显,可作为现有结核病诊断体系的有效补充。 展开更多
关键词 游离DNA(cfDNA) 结核病(TB) 数字PCR(ddPCR)技术 鉴别诊断
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糙果苋快速分子检测技术研究 认领 引用
3
作者 吴晶 郭静 +5 位作者 伏建国 杨晓军 张新第 马元伟 梁建国 李井干 《植物检疫》 2025年第6期57-61,共5页
糙果苋(Amaranthus tuberculatus)是当前美国农田的一种恶性杂草,已对多种除草剂产生了抗药性,可造成农作物大量减产。进口美国大豆、玉米等粮谷中经常截获糙果苋种子。为了准确、快速地鉴定糙果苋种子,本文设计了糙果苋特异性引物探针... 糙果苋(Amaranthus tuberculatus)是当前美国农田的一种恶性杂草,已对多种除草剂产生了抗药性,可造成农作物大量减产。进口美国大豆、玉米等粮谷中经常截获糙果苋种子。为了准确、快速地鉴定糙果苋种子,本文设计了糙果苋特异性引物探针,利用核酸快释技术,改进了实时荧光PCR仪的升降温速度,可以在30 min左右准确检测出进境粮谷中携带的单粒糙果苋种子。该技术大大缩短了进口粮谷中糙果苋的检疫鉴定时间,还可应用于口岸一线杂草监测工作。 展开更多
关键词 糙果苋 核酸免提取 实时荧光PCR 快速检测
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一种基于PCR扩增鉴定无Cas9突变体的快速方法 认领 引用
4
作者 李倩 刘庆 +2 位作者 王远江 韦存虚 王娟 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2025年第7期1046-1056,共11页
CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于多个物种中。含Cas9的突变体存在脱靶风险,并含有潜在的转基因安全问题。当前,虽然研究者们已开发视觉辅助系统用于筛选无Cas9的植株,但基于PCR扩增的检测方法仍必不可少。然而,此过程中还普遍存在... CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于多个物种中。含Cas9的突变体存在脱靶风险,并含有潜在的转基因安全问题。当前,虽然研究者们已开发视觉辅助系统用于筛选无Cas9的植株,但基于PCR扩增的检测方法仍必不可少。然而,此过程中还普遍存在一些问题,如快速DNA提取方法引起的扩增不稳定性、Cas9和潮霉素B磷酸转移酶编码基因(Hyg)扩增的假阳性等。本研究旨在建立一种快速可靠的基于PCR扩增Cas9和Hyg方法检测无Cas9突变体。本研究首先对3种快速DNA提取方法进行评估。其中,改良蔗糖法在扩增这两个基因时的表现最佳。其次,本研究排查PCR扩增时存在的假阳性因素。结果表明DNA提取和存储温度、PCR体系配制的环境、PCR循环数等对这两个基因的扩增均有影响。基于以上结果,本研究建立了一种可靠、高效的筛选转基因株系的方法,并验证了该方法在大规模筛选中的可操作性。除此之外,本方法也适用于以Hyg作为选择性标记的其他类型转基因株系的鉴定。 展开更多
关键词 无Cas9突变体 PCR Hyg 快速DNA提取 假阳性
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产前无创胎儿多重血型抗原基因型联合检测在胎儿新生儿溶血病产前早期诊断中的临床意义 认领 引用
5
作者 胡舒瑶 赵亚琦 +3 位作者 邓罗华 岳银萍 李艳 韩卫 《中国输血杂志》 CAS 2025年第11期1535-1541,共7页
目的建立基于荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术的产前无创胎儿ABO、RhD及RhCE血型基因型联合检测方法,并评估其在胎儿新生儿溶血病(Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn,HDFN)产前早期诊断中的临床价值... 目的建立基于荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术的产前无创胎儿ABO、RhD及RhCE血型基因型联合检测方法,并评估其在胎儿新生儿溶血病(Hemolytic Disease of the Fetus and Newborn,HDFN)产前早期诊断中的临床价值。方法前瞻性纳入2022年1月至2024年12月于本院产检的200例单胎妊娠高风险孕妇,分为ABO血型不合组100例、RhD血型不合组50例、RhCE血型不合组50例及对照组200例,采用FQ-PCR技术检测母体血浆中胎儿游离DNA(cff-DNA),靶向ABO系统(261delG、796C>A)、RHD基因外显子5/7及RhCE系统(C/c、E/e)关键位点。产后通过脐带血血清学验证血型及溶血三项检测(直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验),评估检测一致性及高危因素。结果ABO、RhD及RhCE血型的检测符合率分别为98.0%(98/100)、100.0%(50/50)及96.0%(48/50)。ABO血型不合组HDFN发生率为69.0%(69/100),显著高于RhD血型不合组(10.0%,5/50)及RhCE血型不合组(2.0%,1/50)。多因素分析显示,母亲O型血(OR=3.021)、母亲RhD阴性(OR=5.253)及产妇年龄≥35岁(OR=1.950)为HDFN独立危险因素(P均<0.05)。结论产前无创多重血型抗原基因型联合检测可显著提升HDFN早期诊断效能,为高危孕妇提供精准预警。 展开更多
关键词 胎儿新生儿溶血病 无创产前诊断 荧光定量PCR RhCE血型 胎儿游离DNA
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传粉网络构建的定性定量分子研究:应用与展望 认领 引用 被引量：12
6
作者 郎丹丹 唐敏 周欣 《生物多样性》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期445-456,共12页
传粉者是重要的生态功能提供者,在维持稳定的生态系统和高效的农业生产力中发挥着重要作用。因此,传粉网络的构建和监测工作对评价生态系统平衡和调控农业生产至关重要。该工作的基础就是通过对传粉者及植物的物种鉴定构建其相关性。传... 传粉者是重要的生态功能提供者,在维持稳定的生态系统和高效的农业生产力中发挥着重要作用。因此,传粉网络的构建和监测工作对评价生态系统平衡和调控农业生产至关重要。该工作的基础就是通过对传粉者及植物的物种鉴定构建其相关性。传统的形态学物种鉴定对分类学专家的专业知识、时间和经验都提出较高的要求。DNA条形码和高通量测序技术(high-throughput sequencing,HTS)的发展及其在传粉网络研究中的应用,提供了高效、准确鉴定传粉者与植物的方法,大大提高了传粉网络构建的效率。本文阐述了传粉网络研究相关的研究方法和技术进展,并提出利用高通量测序技术结合无PCR扩增(PCR-free)的"超级条形码"技术,有望实现以更高的灵敏度和分辨率对混合物种样品进行定性及相对定量的监测。该方法的有效性已在其他生物多样性研究中得以验证,在传粉网络研究中虽处于初始阶段,但应用前景广阔。 展开更多
关键词 线粒体 叶绿体 花粉 宏条形码 宏基因组 PCR-free 定量
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PCR双向开启硫黄素T/G四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌方法研究 认领 引用
7
作者 尚慧杰 徐建国 +2 位作者 彭育勃 陈伟 姚丽 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2025年第5期677-681,687,共5页
文章提出一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的硫黄素T(ThT)/G-四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌(Salmonella)方法。以沙门氏菌的invA基因为检测目标,设计特异性发卡引物,通过PCR和特异功能的G-四链体实现对沙... 文章提出一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的硫黄素T(ThT)/G-四链体探针无标记检测牛奶中沙门氏菌(Salmonella)方法。以沙门氏菌的invA基因为检测目标,设计特异性发卡引物,通过PCR和特异功能的G-四链体实现对沙门氏菌的检测。结果表明,该检测方法操作简便、特异性强、灵敏度高。在最优反应体系下,沙门氏菌的浓度与信号输出值具有良好的线性关系,其回归方程为Y=27.149X+0.292,R2=0.981,其线性范围为102~106 CFU/mL。纯菌样品和实际样品都能在细菌浓度为102 CFU/mL时检测出信号,表明该方法具有抗基质效应。研究结果为食源性致病菌的检测提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 G-四链体 硫黄素T 沙门氏菌 无标记检测 聚合酶链式反应(PCR)
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血液样本中DNA与RNA提取效率的研究 认领 引用 被引量：2
8
作者 宿星蕾 路平 +3 位作者 彭俊杰 汪滋民 宋萍 韩达 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2025年第4期476-486,共11页
目的·全面评估不同试剂盒及不同方法对血液样本中DNA与RNA提取的效率。方法·收集来自阿尔茨海默病(20例)、纤维化(5例)、结直肠癌患者(108例)及健康个体(12例)的血液样本,共145例。采用柱法试剂盒(Kit A)和核酸提取仪来提取... 目的·全面评估不同试剂盒及不同方法对血液样本中DNA与RNA提取的效率。方法·收集来自阿尔茨海默病(20例)、纤维化(5例)、结直肠癌患者(108例)及健康个体(12例)的血液样本,共145例。采用柱法试剂盒(Kit A)和核酸提取仪来提取血液中白细胞的基因组DNA(genomic DNA,gDNA)。使用5种试剂盒(Kit B~F),通过柱法(Kit B、E)或磁珠法(Kit C、D、F)对血浆中的游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)和游离RNA(cell-free RNA,cfRNA)进行提取。对Kit B提取过程进行优化,包括增加血浆上样体积和延长洗脱孵育时间,并且采用该方案对100例结直肠癌患者血浆样本cfDNA进行提取。使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)对提取出的DNA和RNA进行定量分析,比较提取的DNA或RNA分子的数量以评估提取效率,并结合成本及操作时间等进行综合评价。结果·在gDNA提取中,尽管核酸提取仪缩短了操作时间,但Kit A(柱法)提取的DNA分子数的中位数是其25.36倍(P<0.001)。对于cfDNA提取,3种试剂盒(Kit B~D)的总体效率相近,但Kit B(柱法)在低浓度样本中的表现较为突出,其DNA提取量的平均值分别是基于磁珠法的Kit D和Kit C的4.24倍和1.18倍。提取步骤优化后的Kit B进一步提高了cfDNA的提取效率。对比3例样本在不同血浆上样体积下的cfDNA提取量,结果显示大上样体积提取的cfDNA量分别为小上样体积的3.98倍、2.38倍和3.82倍;对100例结直肠癌患者血浆样本cfDNA提取结果表明,该提取方案可在临床样本中稳定提取足够量的cfDNA。在cfRNA提取方面,Kit E(柱法)因其高效、便捷且经济性好,被广泛推荐;其提取的cfRNA含量中位数是Kit F(磁珠法)的5.01倍。比较血浆中cfDNA与cfRNA的拷贝数,结果显示每毫升血浆中cfRNA的拷贝数平均数是cfDNA的27.65倍。结论·Kit A、Kit B和Kit E分别在白细胞gDNA、血浆cfDNA以及血浆cfRNA提取方面表现出更高的效率。然而,尽管Kit E在提取效率和成本上具有优势,其安全性仍需进一步评估。 展开更多
关键词 核酸提取 血浆游离DNA 血浆游离RNA 提取试剂盒 实时荧光定量PCR
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应用巢式PCR检测孕妇血浆中cffDNA RHD基因型的研究 认领 引用 被引量：3
9
作者 陈利萍 左琴琴 +2 位作者 徐华 周华友 张印则 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2016年第8期785-787,共3页
目的建立巢式PCR技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA(cffDNA)的RHD基因型,以预测胎儿RhD血型。方法采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取32例RhD阴性孕妇血浆游离DNA,针对RHD外显子7和10分别设计外侧、内侧2组特异性引物,巢式PCR方法... 目的建立巢式PCR技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA(cffDNA)的RHD基因型,以预测胎儿RhD血型。方法采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取32例RhD阴性孕妇血浆游离DNA,针对RHD外显子7和10分别设计外侧、内侧2组特异性引物,巢式PCR方法检测孕妇血浆游离胎儿DNA的RHD型,测序验证PCR产物的序列特异性。结果孕妇血浆游离DNA经巢式PCR扩增后,有27例成功扩增出RHD外显子7、10特异性条带,5例未检测到RHD基因特异性扩增,32例中有30例胎儿RHD型与出生后血型相符,检测准确率为93.1%。结论采用巢式PCR技术检测RhD阴性孕妇血浆游离胎儿DNA来判定胎儿RHD型,具有良好的准确性、敏感性和特异性,为RhD新生儿溶血病的早期诊断提供了一种新的、可靠的检测手段。 展开更多
关键词 巢式PCR 血浆游离胎儿DNA RHD RhD新生儿溶血
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利用多重数字PCR检测KRAS相关突变 认领 引用 被引量：4
10
作者 邬升超 黄斐 +7 位作者 赵瀛 虞倩 韩序 王蓓丽 张春燕 郭玮 楼文晖 潘柏申 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期697-703,709,共7页
目的 建立多重数字PCR体系检测血浆细胞游离DNA（cell-free DNA, cfDNA）中KRAS第2外显子12、13密码子的7种突变。方法 构建7种KRAS突变型质粒用以建立多重数字PCR检测体系，以灵敏度、特异度和动态范围为主要参数评估体系的性能。利用... 目的 建立多重数字PCR体系检测血浆细胞游离DNA（cell-free DNA, cfDNA）中KRAS第2外显子12、13密码子的7种突变。方法 构建7种KRAS突变型质粒用以建立多重数字PCR检测体系，以灵敏度、特异度和动态范围为主要参数评估体系的性能。利用该体系检测15例手术可切除的胰腺导管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC）患者血浆cfDNA中KRAS第2外显子12、13密码子突变情况，并与ARMs的检测结果进行比对。结果 自建的多重数字PCR在0.01%～10%的动态范围内线性良好。两个检测体系的灵敏度分别可达到0.025%和0.043%。15名PDAC患者组织中KRAS突变的阳性率达到100%。数字PCR检测血浆cfDNA所得的结果与组织结果的匹配率达到40%，ARMs检测组织和血浆cfDNA结果的匹配率为20%。15例样本中使用多重数字PCR检测到血浆cfDNA的最低丰度达到0.09%。结论 多重数字PCR具备高灵敏度和特异性，可用于准确定量外周血cfDNA中KRAS相关突变的水平。 展开更多
关键词 多重数字PCR 血浆游离DNA KRAS
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游离DNA完整性检测对良恶性胸腹腔积液鉴别诊断的价值研究 认领 引用 被引量：2
11
作者 许波银 鞠少卿 +4 位作者 汪晓莺 郝天波 戚菁 王跃国 刘才旺 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第9期1363-1366,共4页
目的探讨游离DNA(cfDNA)的完整性(ALU247/ALU115)检测对良恶性胸腹腔积液鉴别诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法,测定86份良恶性胸腹腔积液标本中ALU115和ALU247片段浓度并计算完整性;同时对标本中LDH、AFP、CEA、SF、SCC等传统指... 目的探讨游离DNA(cfDNA)的完整性(ALU247/ALU115)检测对良恶性胸腹腔积液鉴别诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法,测定86份良恶性胸腹腔积液标本中ALU115和ALU247片段浓度并计算完整性;同时对标本中LDH、AFP、CEA、SF、SCC等传统指标进行检测。绘制受试者工作曲线(ROC曲线),根据曲线下面积评估各标记物诊断意义;运用统计学方法,与传统指标进行对比,评价cf DNA完整性在良恶性胸腹腔积液鉴别诊断中的应用价值。结果恶性组DNA完整性指数(ALU247/ALU115)显著高于良性组,差异具有统计学意义(P<0.01),ROC曲线下面积为0.70。cfDNA浓度和完整性联合检测的灵敏度、特异度及准确度均显著高于其他各项指标单独或联合检测。该联合检测方式与cfDNA联合传统指标在鉴别诊断良恶性胸腹腔积液方面比较差异无统计学意义。结论 cfDNA完整性检测是良恶性胸腹腔积液鉴别诊断可能的良好靶标。ALU115、ALU247片段浓度和完整性(ALU247/ALU115)三项联合检测诊断价值更高。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 游离DNA 良恶性胸腹腔积液
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用不提取核酸PCR扩增孕妇血浆中胎儿游离DNA的SRY和FMR1基因 认领 引用 被引量：3
12
作者 陈斌 严伟 +3 位作者 张琼 邹晓 周小棉 钟志敏 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期253-255,共3页
目的建立一种不提取核酸的孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测方法。方法构建不提取核酸PCR法,用巢式PCR扩增Y染色体上的SRY基因序列和X染色体上的FMR1基因序列,检测44例孕妇血浆中游离DNA。根据随访判断结果的准确性。结果 44例孕妇经随访确... 目的建立一种不提取核酸的孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测方法。方法构建不提取核酸PCR法,用巢式PCR扩增Y染色体上的SRY基因序列和X染色体上的FMR1基因序列,检测44例孕妇血浆中游离DNA。根据随访判断结果的准确性。结果 44例孕妇经随访确认24例有男性胎儿,20例有女性胎儿。24例孕男性胎儿的孕妇血浆标本中有21例扩增出SRY基因和FMR1基因,敏感性为87.5%(21/24);20例孕女性胎儿的孕妇血浆标本中有17例扩增出FMR1基因,敏感性为85.0%(17/20)。结论建立的不提取核酸PCR法具有快速、简便等优点,可用于性连锁遗传病的产前诊断。 展开更多
关键词 胎儿游离DNA SRY基因 FMR1基因 不提取核酸聚合酶链反应
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SRY和maspin基因对胎儿游离DNA的检测效率 认领 引用 被引量：2
13
作者 余红 赵矫 +2 位作者 张宇娇 赵小平 税青林 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2010年第19期2735-2737,共3页
目的:探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记代替SRY基因检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性。方法:分别以SRY基因和不同甲基化状态的maspin基因序列为标记对孕妇和非妊娠女性血浆中的游离DNA进行PCR和甲基化PCR检测,并对结果进行统计学... 目的:探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记代替SRY基因检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性。方法:分别以SRY基因和不同甲基化状态的maspin基因序列为标记对孕妇和非妊娠女性血浆中的游离DNA进行PCR和甲基化PCR检测,并对结果进行统计学分析。结果:孕男胎孕妇血浆DNA标本中SRY基因的检出率为93.9%。u-maspin(maspin基因的非甲基化序列)仅在妊娠组中被检测出,检出率88.3%。两检出率间的差异不具有统计学意义。m-maspin(maspin基因的甲基化序列)在妊娠组和非妊娠组中的检出率无差异。结论:u-maspin基因可作为非性别依赖的胎儿DNA特异性标志物,相对于以SRY基因作为标志物有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。 展开更多
关键词 表观遗传学 甲基化特异性PCR SRY基因 胎儿游离DNA
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利用RT-PCR对脱毒草莓苗病毒检测研究 认领 引用 被引量：9
14
作者 陈晓军 王敬东 +2 位作者 马洪爱 陈虞超 宋玉霞 《北方园艺》 CAS 北大核心 2010年第23期146-148,共3页
利用RT-PCR技术,以草莓肌动蛋白基因序列为内标,结合4种草莓病毒特异性扩增,检测草莓组培脱毒苗是否脱毒情况。结果表明:此内标与这4种草莓病毒的特异性扩增的结合,能较好达到病毒检测的目的,减少了结果判断的盲目性,为准确、快速检测... 利用RT-PCR技术,以草莓肌动蛋白基因序列为内标,结合4种草莓病毒特异性扩增,检测草莓组培脱毒苗是否脱毒情况。结果表明:此内标与这4种草莓病毒的特异性扩增的结合,能较好达到病毒检测的目的,减少了结果判断的盲目性,为准确、快速检测草莓脱毒苗提供了一套较为完整的试验方法。 展开更多
关键词 草莓脱毒苗 RT-PCR SMoV SMYEV SVBV SCV
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免提取冻干式百日咳鲍特菌核酸检测方法建立及应用 认领 引用 被引量：4
15
作者 郭鹏波 章波 +1 位作者 王彦红 高利飞 《实验与检验医学》 CAS 2021年第4期789-791,801,共3页
目的本研究建立快速、便携、特异、敏感的百日咳鲍特菌实时定量PCR(Q-PCR)核酸检侧方法,并初步探索在呼吸道感染患者中百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)检测的应用价值。方法靶基因采用IS481基因,优化反应试剂实现免核酸提取直接扩增... 目的本研究建立快速、便携、特异、敏感的百日咳鲍特菌实时定量PCR(Q-PCR)核酸检侧方法,并初步探索在呼吸道感染患者中百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)检测的应用价值。方法靶基因采用IS481基因,优化反应试剂实现免核酸提取直接扩增,对体系进行冻干处理,简化操作步骤。并对所收集得到的上呼吸道感染者的咽拭子标本进行检测评价。结果本检测体系检出限达到100copies/mL,227例急性上呼吸道感染者的咽拭子标本中,其阳性检出率为3.96%。结论成功建立了高敏感、简便、快速的百日咳核酸检测方法,为百日咳诊断提供了新手段。 展开更多
关键词 百日咳鲍特菌 实时荧光定量PCR IS481基因 免核酸提取 冻干
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3种检测方法在脱毒马铃薯种薯病毒检测中的应用及检测效果比较 认领 引用 被引量：6
16
作者 张丽 聂峰杰 +5 位作者 张国辉 巩檑 石磊 陈虞超 甘晓燕 宋玉霞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期119-124,共6页
为进一步明确适用于脱毒马铃薯种薯的病毒检测方法,为脱毒马铃薯生产提供更为有效和准确的病毒检测技术指导。应用反转录聚合酶联式反应(RT-PCR)、双抗体夹心-酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)以及胶体金免疫层析技术(GICA)3种方法,对脱毒马... 为进一步明确适用于脱毒马铃薯种薯的病毒检测方法,为脱毒马铃薯生产提供更为有效和准确的病毒检测技术指导。应用反转录聚合酶联式反应(RT-PCR)、双抗体夹心-酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)以及胶体金免疫层析技术(GICA)3种方法,对脱毒马铃薯生产中的马铃薯X病毒(PVX)、S病毒(PVS)进行检测,在不同品种及不同繁育等级的种薯中分别比较3种方法的检测效果。结果表明,RT-PCR对马铃薯原原种中的2种病毒检测效果显著优于其他2种方法;3种方法对一级种的2种病毒检测效果无显著差异。RTPCR非常适用于原原种病毒的检测;ELISA方法对原种及一级种大样本抽检更为适用,而GICA因成本高,更适宜一级种小样本的快速抽检。 展开更多
关键词 反转录聚合酶联式反应 双抗体夹心—酶联免疫吸附法 胶体金免疫层析技术 马铃薯 马铃薯X病毒 马铃薯S病毒 病毒检测
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笼养和散养蛋鸡小肠细菌菌群区系的聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳分析 认领 引用 被引量：1
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作者 崔一喆 王秋菊 +3 位作者 李悦 苏景 周亚强 张宇辰 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1677-1686,共10页
本试验对笼养和散养蛋雏鸡和成年蛋鸡的小肠中细菌种类进行分析。取8周龄雏鸡和30周龄产蛋鸡整个小肠内容物,进行聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析,结合指纹克隆,研究鸡小肠细菌菌群的DNA指纹图谱。结果显示,共从蛋鸡的... 本试验对笼养和散养蛋雏鸡和成年蛋鸡的小肠中细菌种类进行分析。取8周龄雏鸡和30周龄产蛋鸡整个小肠内容物,进行聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析,结合指纹克隆,研究鸡小肠细菌菌群的DNA指纹图谱。结果显示,共从蛋鸡的肠内容物中分离出39株细菌,有4个菌门,包括变形菌(2株,5.1%),拟杆菌(4株,10.2%),放线菌(5株,12.8%)和厚壁菌门(21株,53.8%),以及7个环境样品(不可培养细菌)。不同阶段蛋鸡不同肠段存在不同的细菌种类,在成年母鸡和自由放养鸡肠道中的细菌种类比雏鸡和笼养鸡丰富。所有分离细菌中,共分离得到10株乳酸菌,除陪伴粪球菌外,其余9株乳杆菌作为微生态制剂后备菌保存。结果提示,饲养模式和饲养阶段对蛋鸡肠道中细菌群落种类分布有很大影响,散养模式细菌群落更丰富,成年鸡较雏鸡肠道细菌多。 展开更多
关键词 蛋鸡 笼养 散养 PCR-DGGE 菌群鉴定
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数字PCR在液体活检中的研究进展 认领 引用 被引量：3
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作者 隋亚鑫 蒋涛 +5 位作者 杨林林 史文杰 张嵘 王夏璐 田亚平 张朋军 《标记免疫分析与临床》 CAS 2020年第5期905-909,共5页
数字PCR是近几年新兴的核酸检测手段,因其具有高灵敏度、高精确度、高重现性,正在逐渐取代先前的普通PCR方法。数字PCR目前已广泛应用在SNP、甲基化、二代测序辅助建库、疾病的诊断和治疗监控、微生物(病毒、细菌等)的检测,它将会有力... 数字PCR是近几年新兴的核酸检测手段,因其具有高灵敏度、高精确度、高重现性,正在逐渐取代先前的普通PCR方法。数字PCR目前已广泛应用在SNP、甲基化、二代测序辅助建库、疾病的诊断和治疗监控、微生物(病毒、细菌等)的检测,它将会有力推动生命科学、医学诊断、检验检疫、农业等领域的快速发展。本综述主要讨论数字PCR在检测血浆游离DNA方面的研究进展。 展开更多
关键词 数字PCR 液体活检 血浆游离DNA 癌症
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我国大蒜种质资源携带的病毒种类及分布 认领 引用 被引量：1
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作者 阳文龙 王洋 +5 位作者 宋江萍 张晓辉 Hassan H.A.Mostafa 付艳 王海平 李锡香 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期4868-4877,共10页
病毒感染导致大蒜产量下降,品质变劣。大蒜种质资源的收集、监测和安全保存对大蒜产量、抗病性和品质的遗传改良具有重要意义。【目的】检测我国大蒜资源中病毒的携带和分布情况。【方法】采用2种多重反转录聚合酶链式反应(reverse tran... 病毒感染导致大蒜产量下降,品质变劣。大蒜种质资源的收集、监测和安全保存对大蒜产量、抗病性和品质的遗传改良具有重要意义。【目的】检测我国大蒜资源中病毒的携带和分布情况。【方法】采用2种多重反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法对689份大蒜种质资源中的7种病毒的分布进行了检测。【结果】研究表明,青葱X病毒属病毒[包括GarV-A、GarV-B、GarV-C、GarV-D、GarV-E、GarV-X、葱病毒X(SHVX)]携带率最高(98.69%),接着依次是洋葱黄矮病毒(OYDV,90.13%)、大蒜螨传丝状病毒(GMBFV,71.12%)、韭菜黄条病毒(LYSV,50.65%)、葱潜隐病毒(SLV,49.20%)、马铃薯Y病毒(PVY,41.94%)和大蒜普通潜隐病毒(GarCLV,32.08%)。其中有27份资源(3.92%)含有7种病毒,122份(17.71%)含有6种病毒,190份(27.58%)携带5种病毒,150份(21.77%)携带4种病毒,129份(18.72%)含有3种病毒,62份(9.00%)含有2种病毒,7份(1.02%)只携带1种病毒,而有2份资源(0.29%)没有检测到病毒。此外,大蒜资源种植世代与病毒种类数呈显著正相关(P<0.05),茎尖培养可以有效地减少或清除病毒。【结论】本研究明确了我国大蒜种质资源中7种主要病毒的分布情况,为大蒜种质资源的安全保存提供了理论参考,也为大蒜的抗病毒育种提供了基因资源。 展开更多
关键词 大蒜 种质资源 病毒 多重RT-PCR 茎尖脱毒培养
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孕妇血浆中胎儿DNA的数量变化的研究 认领 引用 被引量：2
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作者 任晨春 苗绪红 宋文芹 《现代妇产科进展》 北大核心 2006年第8期614-616,共3页
目的探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA的数量变化的规律。方法提取68例孕妇血浆中的DNA,用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测其胎儿SRY基因,并对其中怀男胎孕妇外周血浆中的胎儿DNA的数量进行动态分析。结果在怀男胎的孕妇外周血中... 目的探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA的数量变化的规律。方法提取68例孕妇血浆中的DNA,用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测其胎儿SRY基因,并对其中怀男胎孕妇外周血浆中的胎儿DNA的数量进行动态分析。结果在怀男胎的孕妇外周血中均检测到了SRY基因,而在怀女胎的孕妇中未检测到。胎儿游离DNA最早出现的时间平均为7.7周,SRY基因拷贝数平均为5.53copies/ml。随孕期的增加,母血浆中胎儿DNA的含量在逐渐增加,并得出各孕周的标准参考值。在分娩后母血中胎儿DNA的含量就显著下降,到分娩后第二天就完全不能检测到。结论孕妇外周血浆中游离DNA的含量变化具有一定的规律,可以利用其进行无创伤性产前诊断。 展开更多
关键词 母体血浆 胎儿游离DNA 实时荧光定量PCR 清除时间
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