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树莓果肉多糖RPP-1对RAW264.7细胞免疫功能的影响 认领 引用 被引量：2
1
作者 王雨婷 尹星星 +3 位作者 杨永晶 王学红 陆杰 晁沐 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第1期133-143,共11页
[目的]本研究旨在探究树莓果肉多糖RPP-1的体外免疫活性,并结合转录组学初步分析RPP-1免疫调节的作用机制。[方法]以来源于树莓果肉的多糖组分RPP-1为试验材料,分别采用CCK-8法和荧光探针法测定RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力和... [目的]本研究旨在探究树莓果肉多糖RPP-1的体外免疫活性,并结合转录组学初步分析RPP-1免疫调节的作用机制。[方法]以来源于树莓果肉的多糖组分RPP-1为试验材料,分别采用CCK-8法和荧光探针法测定RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞活力和吞噬能力的影响,利用RT-qPCR和ELISA分别从转录和蛋白质水平检测RPP-1对RAW264.7细胞上清液中NO和细胞因子的作用。同时,采用转录组学对差异表达基因(differentially expressed genes,DEG)进行基因本体(gene ontology,GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析和蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析。[结果]RPP-1能显著促进小鼠巨噬细胞RAW264.7的活力和吞噬能力,并明显增强细胞培养上清液中的NO、IL-6、IL-1β和TNF-α水平,提高iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的相对表达水平,显示出较强的体外免疫增强作用。转录组学分析发现,与空白组相比,经RPP-1处理的RAW264.7细胞中共有286个与免疫调节相关的DEG,其中111个DEG下调,175个DEG上调;GO功能注释结果表明这些DEG主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程、发育过程和免疫系统过程;KEGG富集分析结果显示差异基因显著富集于系统性红斑狼疮、细胞因子-细胞因子受体相互作用和TNF信号通路;PPI网络分析发现枢纽基因为IL-6、IL-1β、Rad51ap1、H2afx、Birc5、Ccl5和Pbk。[结论]树莓果肉多糖RPP-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7具有免疫增强作用,结合体外活性试验与转录组学分析结果,RPP-1的免疫增强作用可能通过细胞因子-细胞因子受体相互作用及TNF信号传导途径调节实现,且其关键基因为IL-6、IL-1β。 展开更多
关键词 树莓果肉多糖 RPP-1 RAW264.7 体外免疫调节 转录组学
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丁内酯-Ⅰ对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应和氧化应激的作用及机制 认领 引用 被引量：1
2
作者 徐双 冯琬迪 +6 位作者 刘冬妮 张文芳 冯丹虹 赵闻乐 杨献文 杜冠华 王月华 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2026年第3期294-300,共7页
目的研究丁内酯-Ⅰ(butyrolactone-Ⅰ,BTL-Ⅰ)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应和氧化应激的作用及机制。方法应用LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应模型评价BTL-Ⅰ的作用及机制。格里斯试剂检测细胞上清一氧化... 目的研究丁内酯-Ⅰ(butyrolactone-Ⅰ,BTL-Ⅰ)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应和氧化应激的作用及机制。方法应用LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应模型评价BTL-Ⅰ的作用及机制。格里斯试剂检测细胞上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)水平。荧光探针2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。免疫印迹法检测相关通路蛋白诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX2)、核因子E相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)及信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription,STAT3)的表达,包括Nrf2、Kelch样ech关联蛋白1(Kelch like ech-associated protein 1,Keap1)、抗氧化酶超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)、超氧化物歧化酶2(superoxide dismutase 2,SOD2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)以及STAT3及其上游蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase 2,JAK2)的磷酸化蛋白水平。结果与LPS模型组比较,BTL-Ⅰ显著降低NO、IL-6、IL-1β、MCP-1,iNOS、COX2和ROS水平,显著增加Nrf2、HO-1、SOD1和SOD2蛋白水平,显著降低Keap1、STAT3及其上游蛋白JAK2的磷酸化水平。结论BTL-Ⅰ抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应和氧化应激,机制与调控Nrf2和STAT3信号通路相关。 展开更多
关键词 丁内酯-Ⅰ RAW264.7细胞 炎症 氧化应激 核因子E相关因子2/信号转导和转录激活因子3
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石斛碱修复Caco-2+HT29-MTX/RAW 264.7细胞肠屏障并改善HepG2细胞胰岛素抵抗的双重作用 认领 引用
3
作者 覃璐琪 周怡霞 +4 位作者 范蓓 孙晶 卢聪 刘佳萌 王凤忠 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2026年第5期1-12,共12页
为探讨石斛碱修复肠屏障损伤和改善胰岛素抵抗的作用,研究建立Caco-2+HT29-MTX/RAW264.7共培养细胞模型和胰岛素抵抗HepG2细胞模型,采用跨上皮电阻(TEER)、实时荧光定量PCR和蛋白印迹等技术进行评估。结果表明,相较模型组,石斛碱能维持T... 为探讨石斛碱修复肠屏障损伤和改善胰岛素抵抗的作用,研究建立Caco-2+HT29-MTX/RAW264.7共培养细胞模型和胰岛素抵抗HepG2细胞模型,采用跨上皮电阻(TEER)、实时荧光定量PCR和蛋白印迹等技术进行评估。结果表明,相较模型组,石斛碱能维持TEER值在200Ω·cm2以上,上调紧密连接蛋白Claudin-1(72.19%)、Occludin(82.40%)、ZO-1(75.29%)和黏液蛋白MUC2(70.33%)表达水平,其mRNA表达量分别提高1.47%、452.93%、2.11%、10.38%。同时降低促炎因子TNF-α(14.14%)和IL-6(68.93%)水平,提升抗炎因子IL-4(243.96%)和IL-10(41.35%)水平。在胰岛素抵抗模型中,石斛碱以剂量依赖方式增加葡萄糖摄取量(10.70、11.83、13.04 mmol·L-1),提高丙酮激酶(92.14、107.09、122.02 U·g-1protein)和己糖激酶(29.63、73.99、73.84 U·g-1protein)活性,并使糖原含量提高1.2、1.4、1.5倍。综上所述,石斛碱能够有效修复肠道屏障损伤并显著改善胰岛素抵抗,为开发降血糖功能食品和药物提供理论基础。 展开更多
关键词 石斛碱 Caco-2+HT29-MTX/RAW 264.7 HepG2 肠道屏障 胰岛素抵抗
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灯盏花甲素对脂多糖致小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制 认领 引用
4
作者 杨付梅 路青瑜 +3 位作者 郭丽 张启云 周舒婷 孙黔云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第8期1461-1470,共10页
目的研究灯盏花甲素(apigenin-7-O-glucuronide,AG)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)致小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)炎症反应的抑制作用及机制。方法用10、5、2.5μmol·L-1 (高、中、低)浓度的AG预处理RAW 264.7细胞2 h后,再用LP... 目的研究灯盏花甲素(apigenin-7-O-glucuronide,AG)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)致小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)炎症反应的抑制作用及机制。方法用10、5、2.5μmol·L-1 (高、中、低)浓度的AG预处理RAW 264.7细胞2 h后,再用LPS刺激细胞不同时间,采用荧光素酶报告质粒法检测核转录因子(nuclear factor kappa-B,NF-κB)转录活性;免疫荧光法检测NF-κB p65入核情况;qPCR法检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路p38/ERK/JNK、NF-κB信号通路IKK/IκB/p65、信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)的mRNA表达,高内涵细胞分析仪检测细胞ROS的释放;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1 β的含量;Griess法测定NO含量;Western blot检测TLR4蛋白和MAPK及NF-κB信号通路p38、ERK、JNK、IKK、IκB、p65及STAT3总蛋白及其磷酸化蛋白的表达。结果与模型组相比,AG能够抑制p38、ERK、JNK、IKK、IκB、p65及STAT3磷酸化,降低NF-κB、MAPK信号通路相关mRNA以及Tnf-α、Il-6、Tlr4的mRNA表达,减少NF-κB p65入核及核内转录活性,降低ROS水平,抑制炎症介质TNF-α、IL-6、IL-1 β和NO的分泌,下调TLR4蛋白水平。结论AG能够抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,其机制与减少ROS释放及抑制TLR4/MAPK/NF-κB信号通路活化和STAT3磷酸化有关。 展开更多
关键词 灯盏花甲素 炎症 RAW264.7细胞 脂多糖 氧化应激 高内涵技术
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补肾活骨汤含药血清对小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响及其作用机制 认领 引用
5
作者 侯成志 赵勇 +5 位作者 夏迪 俞张镜泽 秦伟凯 董永丽 魏光成 顾金光 《中医正骨》 2026年第3期1-7,29,共7页
目的:探究补肾活骨汤含药血清对小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响及其作用机制。方法:(1)补肾活骨汤含药血清和空白血清制备方法。将24只SD大鼠随机分为补肾活骨汤含药血清制备组和空白血清制备组,每组12只,分别给予补肾活骨汤药... 目的:探究补肾活骨汤含药血清对小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响及其作用机制。方法:(1)补肾活骨汤含药血清和空白血清制备方法。将24只SD大鼠随机分为补肾活骨汤含药血清制备组和空白血清制备组,每组12只,分别给予补肾活骨汤药液和蒸馏水灌胃,连续灌胃7 d后,采集腹主动脉血,制备补肾活骨汤含药血清和空白血清。(2)补肾活骨汤含药血清干预浓度的筛选方法。取第3代小鼠RAW264.7细胞,分为空白对照组及10%、15%、20%、25%补肾活骨汤含药血清组。空白对照组加入10%的空白血清,10%、15%、20%、25%补肾活骨汤含药血清组分别加入10%、15%、20%、25%的补肾活骨汤含药血清。培养24 h后,采用MTT法检测各组小鼠RAW264.7细胞的活力,确定干预浓度。(3)补肾活骨汤含药血清对小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化影响的分析方法。取第3代小鼠RAW264.7细胞,分为空白对照组、诱导分化组及10%、15%、20%补肾活骨汤含药血清组。除空白对照组外,其余各组均加入终浓度为100 ng·mL-1的巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimula-ting factor,M-CSF)和50 ng·mL-1的核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL);同时,空白对照组和诱导分化组加入10%的空白血清,10%、15%、20%补肾活骨汤含药血清组分别加入10%、15%、20%的补肾活骨汤含药血清。培养5 d后,进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,并统计各组小鼠RAW264.7细胞分化的破骨细胞数量。(4)补肾活骨汤含药血清影响小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化作用机制的分析方法。取第3代小鼠RAW264.7细胞,分为空白对照组、诱导分化组、20%补肾活骨汤含药血清组。除空白对照组外,其余各组均加入终浓度为100 ng·mL-1的M-CSF和50 ng·mL-1的RANKL;空白对照组和诱导分化组加入10%的空白血清,20%补肾活骨汤含药血清组加入20%的补肾活骨汤含药血清。培养5 d后,采用实时定量PCR检测TRAP和活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)的mRNA表达水平,采用Western Blot法检测NFATc1、组织蛋白酶K、多囊蛋白1、PDZ结合基序转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)的蛋白表达水平。结果:(1)补肾活骨汤含药血清干预浓度的筛选结果。空白对照组及10%、15%、20%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞活力组间两两比较,差异均无统计学意义(P=0.745,P=0.922,P=0.981,P=0.958,P=0.999,P=0.993),25%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞活力低于空白对照组及10%、15%、20%补肾活骨汤含药血清组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。确定补肾活骨汤含药血清干预浓度为10%、15%、20%。(2)补肾活骨汤含药血清对小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化影响的分析结果。空白对照组无破骨细胞。10%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞分化的破骨细胞数量与诱导分化组的差异无统计学意义(P=0.209),15%、20%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞分化的破骨细胞数量均少于诱导分化组和10%补肾活骨汤含药血清组(P=0.000,P=0.001;P=0.016,P=0.002);20%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞分化的破骨细胞数量少于15%补肾活骨汤含药血清组(P=0.046)。(3)补肾活骨汤含药血清影响小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化作用机制的分析结果。诱导分化组、20%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞TRAP、NFATc1的mRNA相对表达量和NFATc1、组织蛋白酶K、多囊蛋白1、TAZ的蛋白相对表达量均高于空白对照组(P=0.000,P=0.000;P=0.002,P=0.011;P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000;P=0.001,P=0.002;P=0.000,P=0.001),20%补肾活骨汤含药血清组小鼠RAW264.7细胞TRAP、NFATc1的mRNA相对表达量和NFATc1、组织蛋白酶K、多囊蛋白1、TAZ的蛋白相对表达量均低于诱导分化组(P=0.000,P=0.000,P=0.008,P=0.005,P=0.006,P=0.022)。结论:补肾活骨汤含药血清能够抑制小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化,其作用机制可能通过下调多囊蛋白1、TAZ的表达进而抑制NFATc1、组织蛋白酶K等破骨细胞分化相关基因的表达。 展开更多
关键词 骨关节炎 补肾活骨汤 破骨细胞 分化 RAW264.7细胞
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罗布麻叶醇提物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的保护作用及机制 认领 引用
6
作者 司丽君 陈丽 +1 位作者 康金森 阿吉艾克拜尔·艾萨 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第5期999-1000,共2页
罗布麻(Apocynum venetum L.)为夹竹桃科罗布麻属植物,其干燥叶是维吾尔族习用药材,兼具药用与茶饮价值,现代药理证实其具有降压、抗氧化、抗炎等多种活性[1−2]。此前,对其抗炎活性的研究大多聚焦于多糖、三萜类成分[3−4],而罗布麻叶醇... 罗布麻(Apocynum venetum L.)为夹竹桃科罗布麻属植物,其干燥叶是维吾尔族习用药材,兼具药用与茶饮价值,现代药理证实其具有降压、抗氧化、抗炎等多种活性[1−2]。此前,对其抗炎活性的研究大多聚焦于多糖、三萜类成分[3−4],而罗布麻叶醇提物(the extract of Apocynum venetum leaves,AVLE)主要活性成分为黄酮、酚酸类,与上述成分存在本质差异[5]。目前,针对AVLE抗炎分子机制的研究少见报道。因此,本研究以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞的体外炎症模型,探究AVLE的抗炎活性及分子机制,为罗布麻叶在抗炎领域的研究与开发提供科学依据。 展开更多
关键词 罗布麻叶 RAW264.7细胞 MAPK信号通路 Nrf2信号通路 抗炎 作用机制
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甜茶树苷F对RAW264.7巨噬细胞M1型极化的作用研究 认领 引用
7
作者 孙伟翔 孙逸凡 +6 位作者 孔明浩 杨佳佳 秦枫 张力 周末 吴植 朱善元 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2026年第4期1915-1924,共10页
【目的】以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)诱导RAW264.7细胞M1型极化为细胞模型,探讨甜茶树苷F(CyF)对RAW264.7细胞M1极化的影响。【方法】通过MTT法检测不同浓度CyF(0、2、4、8、16、32、64μmol/L)对细胞活力的影响,确定安全浓度范... 【目的】以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)诱导RAW264.7细胞M1型极化为细胞模型,探讨甜茶树苷F(CyF)对RAW264.7细胞M1极化的影响。【方法】通过MTT法检测不同浓度CyF(0、2、4、8、16、32、64μmol/L)对细胞活力的影响,确定安全浓度范围。将细胞分为空白对照组(CON)、模型组(LPS+IFN-γ)及CyF给药组(4、8、16μmol/L)。除CON组外,其余各组均用LPS(100 ng/mL)与IFN-γ(2.5 ng/mL)共刺激24 h建立炎症模型。通过Griess法来检测细胞上清液中的一氧化氮(NO)的含量;使用白光显微镜观察细胞形态;通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)分泌量;采用Western blotting检测各组细胞样品磷酸化核转录因子-κB(p-p65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光(IF)法观察iNOS、Arg-1的荧光表达强度;采用实时荧光定量PCR法检测iNOS、Arg-1基因表达情况。【结果】MTT试验表明,与CyF0组的细胞活力相比,CyF4、CyF8和CyF16组的细胞活力显著增加(P<0.05),故4~16μmol/L CyF为细胞培养的最适浓度。与LPS+IFN-γ组相比,各CyF给药组RAW264.7细胞上清液中NO的释放量均显著降低(P<0.05),且细胞的伪足伸长等极化形态得到改善;CyF4、CyF8和CyF16组细胞上清液中TGF-β的分泌量显著升高(P<0.05),CyF8和CyF16组细胞上清液中的IL-10的分泌量显著升高(P<0.05);CyF4、CyF8和CyF16组细胞上清液中的TNF-α显著降低(P<0.05),CyF8和CyF16组细胞上清液中IL-6的生成量显著降低(P<0.05);CyF4、CyF8和CyF16组细胞p-p65和iNOS的蛋白表达量、iNOS/DAPI的荧光强度比值及其基因的相对表达量显著下调(P<0.05),Arg-1的蛋白表达量、Arg-1/DAPI的荧光强度比值及其基因的相对表达量显著上调(P<0.05)。【结论】CyF在4~16μmol/L浓度范围内能有效抑制LPS+IFN-γ诱导的RAW264.7细胞M1型极化,表现为降低NO、TNF-α、IL-6、iNOS及p-p65水平;同时促进M2型极化,表现为升高TGF-β、IL-10及Arg-1表达。CyF可能通过调控核因子-κB(NF-κB)信号通路及巨噬细胞表型转化发挥抗炎作用,具备作为抗炎药物先导化合物的开发潜力。 展开更多
关键词 炎症反应 甜茶树苷F RAW264.7巨噬细胞 巨噬细胞极化 表型转化
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MRWS:multi-stage RAW low-light image enhancement with wavelet information and SNR prior 认领 引用
8
作者 Tao ZHANG Shiqi GAO +1 位作者 Hao WANG Xin ZHAO 《Optoelectronics Letters》 EI 2026年第4期250-256,共7页
For low-light image enhancement tasks,RAW images surpass RGB images due to their high information content,however,their noise and single-channel nature challenge feature extraction.Existing methods using multi-stage c... For low-light image enhancement tasks,RAW images surpass RGB images due to their high information content,however,their noise and single-channel nature challenge feature extraction.Existing methods using multi-stage convolutional neural network(CNN)frameworks struggle with global feature extraction,while single-stage CNN-transformer fusions often result in residual noise.To overcome these limitations,this paper introduces a multi-stage RAW image enhancement network combining CNN and transformer.Considering the characteristics inherent to the task,we devised a CNN-based denoising block for the denoising stage and incorporated wavelet information to enhance frequency features.A transformer-based correction block has been designed for the color and white balance recovery stage,with the white balance being adjusted dynamically using a signal-to-noise ratio(SNR)map.With this design,our method outperforms other state-of-the-art models in all metrics on the Sony and Fuji datasets of see-in-the-dark(SID),and achieves optimal structural similarity index measurement(SSIM)on the mono-colored raw(MCR)dataset. 展开更多
关键词 wavelet information multi stage feature extractionexisting SNR prior raw image rgb images feature extractionwhile low light image
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基于miR-146a-5p/TRAF6/p38MAPK轴探讨溃结宁膏敷贴后大鼠血清对RAW264.7细胞极化的影响 认领 引用
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作者 张伟 邹孟龙 +1 位作者 徐寅 朱莹 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2026年第6期90-98,共9页
目的观察溃结宁膏穴位敷贴后大鼠血清对RAW264.7巨噬细胞极化的影响,基于miR-146a-5p/TRAF6/p38MAPK信号轴探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-146a-5p与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)... 目的观察溃结宁膏穴位敷贴后大鼠血清对RAW264.7巨噬细胞极化的影响,基于miR-146a-5p/TRAF6/p38MAPK信号轴探讨其治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-146a-5p与肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的靶向关系。体外培养小鼠RAW264.7细胞,采用脂多糖(100 ng/mL)联合γ干扰素(20 ng/mL)诱导建立巨噬细胞M1型极化模型。将细胞分为空转染空白组、空转染模型组、miR-146a inhibitor空白组、miR-146a inhibitor模型组、空转染模型+敷贴后血清组、空转染模型+p38抑制剂组、miR-146a inhibitor模型+敷贴后血清组、miR-146a inhibitor模型+p38抑制剂组,并予相应干预。CCK-8实验筛选敷贴后血清最佳干预浓度,Griess法检测一氧化氮(NO)含量,ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10及转化生长因子-β1(TGF-β1)含量,RT-qPCR检测miR-146a-5p表达,免疫荧光及Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、p-p38MAPK蛋白表达,流式细胞术检测CD86、CD206阳性率。结果双荧光素酶报告基因实验表明miR-146a-5p可靶向调控TRAF6。与空转染空白组比较,空转染模型组细胞miR-146a-5p表达显著降低(P<0.01),细胞上清液NO、TNF-α、IL-6含量显著升高,IL-10、TGF-β1含量显著降低(P<0.01),细胞iNOS/Arg-1、CD86阳性率、TRAF6蛋白表达及p-p38MAPK/p38MAPK显著升高,CD206阳性率显著降低(P<0.01);与空转染模型组比较,空转染模型+敷贴后血清组及空转染模型+p38抑制剂组miR-146a-5p表达显著升高(P<0.05,P<0.01),NO、TNF-α、IL-6含量显著降低,IL-10、TGF-β1含量显著升高(P<0.01),iNOS/Arg-1、CD86阳性率、TRAF6蛋白表达及p-p38MAPK/p38MAPK显著降低(P<0.01),CD206阳性率显著升高(P<0.01)。在miR-146a-5p inhibitor条件下,溃结宁膏敷贴后血清上述调控效应显著削弱(P<0.05,P<0.01)。结论溃结宁膏穴位敷贴后血清可能通过上调miR-146a-5p表达,靶向抑制TRAF6/p38MAPK信号轴活化,从而抑制巨噬细胞M1型极化并促进M2型极化,平衡肠道炎症微环境,发挥治疗UC作用。 展开更多
关键词 溃结宁膏 溃疡性结肠炎 miR-146a-5p/TRAF6/p38MAPK轴 巨噬细胞极化 RAW264.7细胞
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Webinar“OpRa:a new transmodel-based exchange format for operational raw data” 认领 引用
10
《China Standardization》 2026年第3期58-58,共1页
This one-hour webinar is a presentation of the new CEN Technical Specification for the exchange format of operational raw data in support of the“observed data”category of the MMTIS EU delegated regulation.
关键词 transmodel OPRA mmtis eu delegated regulation operational raw data exchange format operational raw data cen technical specification webinar exchange format
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基于JAK1/STAT3通路探讨银屑平丸含药血清对RAW264.7巨噬细胞M1/M2极化的影响 认领 引用 被引量：1
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作者 杨柳 席建元 +2 位作者 赵雅情 沈乐乐 蒋宁兰 《中医药信息》 2026年第6期8-14,共7页
目的基于JAK1/STAT3信号通路探究银屑平丸对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞模型M1/M2极化的影响及其调控机制。方法SD大鼠分别灌胃银屑平丸和阿维A溶液,制备相对应含药血清,建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎性模型,设置空白组、模型组(100 n... 目的基于JAK1/STAT3信号通路探究银屑平丸对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞模型M1/M2极化的影响及其调控机制。方法SD大鼠分别灌胃银屑平丸和阿维A溶液,制备相对应含药血清,建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎性模型,设置空白组、模型组(100 ng/mL LPS)、银屑平丸组(20%银屑平丸含药血清+100 ng/mL LPS)、阿维A组(20%阿维A含药血清+100 ng/mL LPS)、抑制剂组(100 ng/mL LPS+10 ng/mL ABT494)、银屑平丸+抑制剂组(20%银屑平丸含药血清+100 ng/mL LPS+10 ng/mL ABT494),按照相应药物给予干预。CCK8法检测银屑平丸含药血清对LPS诱导前后RAW264.7细胞活力的影响;ELISA法检测上清液中白细胞介素(IL)-6、IL 10、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量;Western blot检测JAK1、磷酸化JAK1(p-JAK1)、STAT3及磷酸化STAT3(p STAT3)的蛋白表达水平;流式细胞术检测巨噬细胞亚型标志物的表达情况。结果银屑平丸含药血清对原始RAW264.7细胞无明显毒性作用但能显著抑制经LPS诱导后RAW264.7细胞的增殖,且呈浓度依赖趋势(P<0.05);与空白组比较,模型组IL-6、TNF-α水平、CD86分子表达、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达显著上升(P<0.05),IL-10水平、CD206分子表达显著下降(P<0.05);与模型组比较,银屑平丸组、阿维A组、抑制剂组、银屑平丸+抑制剂组的IL-6、TNF-α水平、CD86分子表达、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达显著下降(P<0.05),IL 10水平、CD206分子表达显著上升(P<0.05);与抑制剂组比较,银屑平丸+抑制剂组的IL-6、TNF-α水平、CD86分子表达、p-JAK1、p-STAT3蛋白表达显著下降(P<0.05),IL-10水平、CD206分子表达显著上升(P<0.05)。结论银屑平丸含药血清通过抑制JAK1/STAT3信号通路,抑制巨噬细胞M1型极化及促进巨噬细胞M2型极化,调节巨噬细胞M1/M2的平衡。 展开更多
关键词 银屑平丸 银屑病 RAW264.7 巨噬细胞极化 JAK/STAT3通路
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Untargeted metabolomic reveals changes in serum metabolism in peanut allergic mice treated by raw and roasted peanuts 认领 引用
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作者 Ying Zhang Jie Zhang +4 位作者 Xin Li Anshu Yang Ping Tong Zhihua Wu Hongbing Chen 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CAS CSCD 2026年第4期1811-1822,共12页
Peanut allergy(PA),which affects an increasing proportion of people,is gaining increasing interests.Clarification of the mechanism underlying PA may aid in the identification of novel biomarkers and strategies for cli... Peanut allergy(PA),which affects an increasing proportion of people,is gaining increasing interests.Clarification of the mechanism underlying PA may aid in the identification of novel biomarkers and strategies for clinical intervention in allergic patients.In this study,raw peanut protein(Raw),roasted peanut protein(Roast),high-molecular-weight protein aggregation from Roast(OH),and the remaining components excluding OH from roasted peanut(OL)were administrated via intraperitoneal injection to challenge BALB/c mice.The allergic response was assessed,and the levels of peanut-specific immunoglobulin E,mouse mast cell protease-I,and T-lymphocyte subsets and secreted cytokines were detected.Then,serum untargeted metabolomics was investigated.Results show that Raw induced robust anaphylaxis in mice and up-or down-regulated 269 serum metabolites that mainly affected amino acid metabolism,including tryptophan metabolism,and induced disruption of tricarboxylic acid(TCA)cycle pathway in serum.Roast,OH and OL induced mild anaphylaxis in mice and mainly affected the glycerophospholipid metabolism in serum.Compared with Tris,OH upregulated the glycerophospholipid metabolism pathway in mouse serum,whereas Roast and OL showed the reversed effect.Mice in the Roast,OL,and OH groups all showed upregulated glycerophospholipid metabolism in serum compared with those in the Raw group.Meanwhile,different components of roasted peanut caused various changes in pathways when compared with each other.Compared with mice in the Roast group,those in the OL group displayed downregulated tryptophan and tyrosine metabolism,and those in the OH group showed upregulated glycerophospholipid metabolism and downregulated TCA cycle.The differences in serum metabolic profiles in mice implied that the processing form of allergen that patients are sensitized to and the severity of allergy should be considered in the analysis of serum biomarkers. 展开更多
关键词 Raw peanut Roasted peanut Allergenicity Serum metabolomics
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基于物理噪声与时空变换器的RAW视频去噪方法 认领 引用
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作者 付政权 徐本源 +1 位作者 谢志华 张维刚 《半导体光电》 CAS 北大核心 2026年第3期536-543,共8页
针对微光视频中由泊松–高斯噪声引起的低信噪比以及噪声随机分布导致的时空不稳定问题,文章提出一种噪声模型引导的时空网络(NM-STNet)。该方法通过噪声感知编码器将物理噪声统计特性嵌入特征学习过程,并利用基于变换器的时空融合模块... 针对微光视频中由泊松–高斯噪声引起的低信噪比以及噪声随机分布导致的时空不稳定问题,文章提出一种噪声模型引导的时空网络(NM-STNet)。该方法通过噪声感知编码器将物理噪声统计特性嵌入特征学习过程,并利用基于变换器的时空融合模块,在无需显式运动估计的情况下实现多帧特征的自适应对齐与聚合。此外,引入基于物理模型的噪声合成及矫正策略,以提升有限训练数据条件下的泛化能力。实验结果表明,NM-STNet在真实弱光视频序列上取得了优于现有方法的去噪性能与时空一致性。 展开更多
关键词 低照度成像 深度学习去噪 低信噪比 RAW视频数据集
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基于糖酵解通路PI3K/Akt/HIF-1α研究黄芩苷诱导RAW264.7细胞M1型极化机制 认领 引用
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作者 王宇航 王泽苑 +3 位作者 姚铖铖 刘晓嘉 张瑜 鄢丹 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2026年第2期523-531,共9页
M1型巨噬细胞介导的抗肿瘤免疫应答对于抑制肿瘤进展至关重要,其功能依赖于有效的代谢重编程。本研究旨在探讨黄芩苷(baicalin)是否通过调控PI3K/Akt/HIF-1α信号轴及其下游糖酵解代谢,促进巨噬细胞向M1型极化。采用RAW264.7细胞模型,通... M1型巨噬细胞介导的抗肿瘤免疫应答对于抑制肿瘤进展至关重要,其功能依赖于有效的代谢重编程。本研究旨在探讨黄芩苷(baicalin)是否通过调控PI3K/Akt/HIF-1α信号轴及其下游糖酵解代谢,促进巨噬细胞向M1型极化。采用RAW264.7细胞模型,通过CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术与免疫荧光技术分析细胞表面标志物CD86的表达;ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平;乳酸试剂盒检测乳酸含量;Western blot检测RAW264.7细胞中PI3K/Akt/HIF-1α糖酵解通路与糖酵解关键限速酶乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)和丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2,PKM2)与蛋白表达;并利用PI3K抑制剂LY294002和糖酵解抑制剂2-DG验证黄芩苷的作用机制。结果显示,黄芩苷在12.5~100μmol·L-1时对RAW264.7细胞的细胞活力无显著影响,在100μmol·L-1时可显著上调RAW264.7细胞中M1型表面标志物CD86及细胞因子TNF-α的表达,上调p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、LDHA与PKM2蛋白的表达,同时乳酸含量升高。而加入LY294002和2-DG后,黄芩苷对CD86的上调作用均被抑制,相关通路蛋白表达也出现回调。本研究揭示黄芩苷通过激活PI3K/Akt/HIF-1α信号轴,增强糖酵解代谢,驱动巨噬细胞向M1型极化,为其在肿瘤免疫调节及炎症相关疾病中的治疗潜力提供了新的代谢机制依据。 展开更多
关键词 黄芩苷 RAW264.7细胞 M1型极化 糖酵解 抗肿瘤
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绿豆醇提物对RAW264.7巨噬细胞免疫活性的影响及其作用机制 认领 引用
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作者 阮燚 余李璐 +7 位作者 廖郑悦 王松涛 黄张君 曹晓念 牛舒琪 沈才洪 刘思静 国锦琳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2026年第7期798-806,共9页
目的探讨绿豆醇提物(mung bean extract,MBE)对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用及其可能的机制,为阐明MBE提高免疫力的作用机制及其应用提供依据。方法用乙醇提取MBE,采用超高压液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(ultra-performance liqui... 目的探讨绿豆醇提物(mung bean extract,MBE)对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用及其可能的机制,为阐明MBE提高免疫力的作用机制及其应用提供依据。方法用乙醇提取MBE,采用超高压液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(ultra-performance liquid chromatography tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)对MBE的物质组成进行分析。采用不同浓度(15.62、31.25、62.5、125、250、500及1000µg/mL)MBE处理RAW264.7细胞,CCK-8法检测细胞活性。分别设空白对照、MBE(62.5、125、250、500µg/mL)、阳性对照(LPS)组,实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达水平,Western blot法检测细胞p65、p38、p-p38、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun Nterminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。选择250µg/mL MBE处理组加入p38、JNK、ERK、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)抑制剂进行NF-κB-丝裂原激活蛋白激酶(NF-κB-mitogen-activated protein kinases,NF-κB/MAPKs)信号通路验证试验。结果当MBE浓度为62.5、125、250、500µg/mL时对细胞无毒性,不同浓度MBE可显著上调RAW264.7细胞的IL-1β、TNF-αmRNA水平,提高巨噬细胞吞噬率;125、250、500µg/mL MBE对p65、p-p38、p-ERK、p-JNK蛋白的表达均有促进作用。加入p38、JNK、ERK和NF-κB抑制剂后,MBE对巨噬细胞吞噬功能的促进作用及IL-1β和TNF-α表达水平均下调。结论MBE可通过NF-κB/MAPKs信号通路激活巨噬细胞,调节免疫功能。 展开更多
关键词 绿豆醇提物 RAW264.7细胞 NF-κB/MAPKs信号通路
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负载镁离子水凝胶的制备及其调控小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7细胞极化性能研究 认领 引用
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作者 刘阳 杨吉垒 +4 位作者 李晓雨 王文丽 左孝轩 李友瑞 宋花蕾 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2026年第8期688-695,共8页
目的:探讨负载不同浓度镁离子水凝胶支架理化性能及其对小鼠单核-巨噬细胞白血病细胞系RAW264.7细胞增殖与极化的影响。方法:利用物理共混法将甲基丙烯酰化明胶(methylpropenylated gelatin,GeLMA)与不同质量的氯化镁(MgCl2)制备成... 目的:探讨负载不同浓度镁离子水凝胶支架理化性能及其对小鼠单核-巨噬细胞白血病细胞系RAW264.7细胞增殖与极化的影响。方法:利用物理共混法将甲基丙烯酰化明胶(methylpropenylated gelatin,GeLMA)与不同质量的氯化镁(MgCl2)制备成负载不同质量百分比镁离子的复合水凝胶支架,并通过扫描电镜、能谱仪分析、傅里叶红外光谱等进行表征分析及降解缓释性能检测。通过活/死细胞染色、CCK-8、细胞骨架染色检测支架生物相容性;免疫荧光染色及实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组支架对RAW264.7细胞极化的影响。结果:Mg 2+成功负载于GeLMA中,并通过缓释促进RAW264.7向M2型极化。结论:GelMA/Mg 2+水凝胶具备良好的生物相容性、亲水性能以及药物释放能力,能够促进RAW264.7向M2型极化。 展开更多
关键词 镁离子 水凝胶 RAW264.7 免疫调控 成骨分化
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基于FXR-ASBT通路研究白头翁汤对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症的作用 认领 引用
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作者 王娇娇 白珊泽 +3 位作者 牛淳 赵仿 李芳 华永丽 《动物医学进展》 北大核心 2026年第3期62-68,共7页
基于法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR)-顶端钠依赖性胆汁酸转运体(apical sodium-dependent bile acid transporter, ASBT)通路探究白头翁汤对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的RAW 264.7细胞炎症的干预作用。用1μg/mL LP... 基于法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR)-顶端钠依赖性胆汁酸转运体(apical sodium-dependent bile acid transporter, ASBT)通路探究白头翁汤对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的RAW 264.7细胞炎症的干预作用。用1μg/mL LPS诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,通过CCK8法检测细胞活力,ELISA试剂盒检测细胞中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素17(IL-17)、一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及环氧合酶2(COX-2)的水平。Western blot及Real-time PCR检测细胞中FXR、TGR5、CYP7A1、CYP27A1、ASBT、ABCB11、FGF15、RXRα蛋白及mRNA的表达。ELISA结果显示,白头翁汤可以有效抑制TNF-α、IL-1β、PGE2、IL-17、NO、iNOS、COX-2的分泌。Western blot结果显示,白头翁汤干预后显著恢复了FXR、TGR5、CYP27A1、ASBT、FGF15各蛋白的表达量,CYP7A1、ABCB11和RXRα表达量有升高趋势,但不显著。Real-time PCR结果显示,白头翁汤干预后显著恢复了CYP7A1、CYP27A1、ASBT、ABCB11的mRNA表达量,FXR、TGR5、FGF15、RXRα的mRNA表达量有升高趋势,但不显著。结果表明白头翁汤可通过激活FXR-ASBT上下游相关信号通路以缓解LPS诱导的RAW264.7细胞炎症。 展开更多
关键词 白头翁汤 RAW 264.7细胞炎症 法尼醇X受体-顶端钠依赖性胆汁酸转运体通路
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鲍曼不动杆菌对RAW264.7巨噬细胞的损伤效应及Siglec-G的调控作用 认领 引用
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作者 许映斐 李玉娟 +1 位作者 高永恒 潘蕾 《空军军医大学学报》 CAS 2026年第8期1100-1105,共6页
目的研究鲍曼不动杆菌(A.baumannii)对小鼠巨噬细胞的损伤作用及Siglec-G的调控作用,并分析其肺炎模型的特征。方法将RAW264.7细胞与A.baumannii共培养,检测细胞存活率及炎症因子水平;用siRNA干扰Siglec-G表达后观察炎症因子变化。通过... 目的研究鲍曼不动杆菌(A.baumannii)对小鼠巨噬细胞的损伤作用及Siglec-G的调控作用,并分析其肺炎模型的特征。方法将RAW264.7细胞与A.baumannii共培养,检测细胞存活率及炎症因子水平;用siRNA干扰Siglec-G表达后观察炎症因子变化。通过气管滴注建立小鼠肺炎模型,观察肺病理、肺泡灌洗液(BALF)炎症因子、蛋白含量、细胞计数和肺湿/干质量比。结果A.baumannii以时间剂量依赖方式诱导RAW264.7细胞死亡,并使细胞上清液TNF-α、IL-6显著升高。干扰Siglec-G表达后,细菌诱导的IL-6分泌被显著抑制,TNF-α水平未受影响。而在未感染状态下,敲低Siglec-G可降低TNF-α的基础表达水平。在体内,感染24 h后小鼠肺部出现显著炎症,BALF中炎症因子、蛋白和细胞总数均升高,但肺湿/干质量比无显著变化。结论A.baumannii可直接损伤巨噬细胞并诱发炎症反应,Siglec-G选择性调控IL-6的产生。小鼠肺炎模型表现为快速进展的炎症而非严重肺水肿。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 巨噬细胞 Siglec-G 炎症 肺炎 RAW264.7细胞 炎症因子 TNF-α
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核旁斑组装转录本1-微RNA-142a-5p轴对尿酸钠诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及其机制的实验研究 认领 引用
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作者 邵天祺 李洋 +2 位作者 刘锟 黄程程 杨振国 《中医正骨》 2026年第6期26-37,共12页
目的:探讨核旁斑组装转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)-微RNA(microRNA,miRNA)-142a-5p轴对尿酸钠诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及其机制。方法:(1)尿酸钠诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的浓度与时间... 目的:探讨核旁斑组装转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript 1,NEAT1)-微RNA(microRNA,miRNA)-142a-5p轴对尿酸钠诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及其机制。方法:(1)尿酸钠诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的浓度与时间筛选。将RAW264.7巨噬细胞分为空白对照组和10μg·m L-1、20μg·m L-1、40μg·m L-1、80μg·m L-1、120μg·m L-1尿酸钠组。除空白对照组外,其余各组细胞分别加入终浓度为10、20、40、80、120μg·m L-1的尿酸钠溶液进行干预。检测各组RAW264.7巨噬细胞活力和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,筛选尿酸钠溶液的最佳干预浓度。再用最佳浓度尿酸钠溶液分别干预RAW264.7巨噬细胞12、24、48 h。检测各时间点RAW264.7巨噬细胞中NEAT1和miRNA-142a-5p的相对表达水平,筛选尿酸钠溶液的最佳干预时间。(2)抑制NEAT1表达对RAW264.7巨噬细胞炎症反应影响的检测。将RAW264.7巨噬细胞分为空白对照组、模型组、NEAT1抑制阴性对照组和NEAT1抑制组。除空白对照组外,其余3组均加入80μg·m L-1尿酸钠溶液,孵育24 h。然后NEAT1抑制阴性对照组和NEAT1抑制组分别转染非靶向干扰小RNA和靶向NEAT1的干扰小RNA。检测各组细胞NEAT1和miRNA-142a-5p的相对表达水平、细胞活力、细胞凋亡率,以及细胞中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、TNF-α含量和IL-1β、IL-6、TNF-α、核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(nucleotide-binding domain leucine-rich repeat and pyrin domain-containing receptor 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteine aspartic acid specific protease,caspase-1)、磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factorκB,p-NF-κB)、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)的蛋白表达水平;以p-NF-κB蛋白相对表达量与NF-κB蛋白相对表达量的比值计算NF-κB磷酸化水平。(3)抑制miRNA-142a-5p表达对沉默NEAT1的RAW264.7巨噬细胞炎症反应影响的检测。将RAW264.7巨噬细胞分为空白对照组、模型组、NEAT1抑制阴性对照组、NEAT1抑制组、NEAT1抑制联合miRNA抑制阴性对照组和NEAT1抑制联合miRNA-142a-5p抑制组。前4组干预方法同实验(2),后2组在NEAT1抑制组干预方法的基础上分别转染miRNA抑制剂阴对照物和miRNA-142a-5p抑制剂。检测各组细胞miRNA-142a-5p的相对表达水平、细胞活力,以及细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量和IL-1β、IL-6、TNF-α、NLRP3、caspase-1、p-NF-κB、NF-κB的蛋白表达水平,计算NF-κB磷酸化水平。(4)NETA1与miRNA-142a-5p靶向结合关系的验证。将巨噬细胞分为NEAT1野生型miRNA抑制阴性对照组、NEAT1野生型miRNA-142a-5p抑制组、NEAT1突变型miRNA抑制阴性对照组和NEAT1突变型miRNA-142a-5p抑制组。NEAT1野生型miRNA抑制阴性对照组和NEAT1野生型miRNA-142a-5p抑制组转染NEAT1野生型报告载体,并分别转染miRNA抑制剂阴对照物和miRNA-142a-5p抑制剂;其余2组转染NEAT1突变型报告载体,并分别转染miRNA抑制剂阴对照物和miRNA-142a-5p抑制剂。采用双萤光素酶报告基因检测系统测定各组萤光素酶荧光值,计算各组相对萤光素酶活性。结果:(1)尿酸钠诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的浓度与时间筛选结果。120μg·m L-1尿酸钠组RAW264.7巨噬细胞的细胞活力低于其他各组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);其他5组之间两两比较,组间差异均无统计学意义。80μg·m L-1尿酸钠组RAW264.7巨噬细胞中的TNF-α含量高于其他各组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000)。80μg·m L-1尿酸钠溶液干预24 h时,RAW264.7巨噬细胞中NEAT1的相对表达水平最高,miRNA-142a-5p的相对表达水平最低。最终筛选出尿酸钠诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的最佳干预浓度为80μg·m L-1、最佳干预时间为24 h。(2)抑制NEAT1表达对RAW264.7巨噬细胞炎症反应影响的检测结果。NEAT1抑制组RAW264.7巨噬细胞中NEAT1的相对表达水平低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.003,P=0.006),miRNA-142a-5p的相对表达水平高于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.000,P=0.001)。NEAT1抑制组RAW264.7巨噬细胞的细胞活力低于空白对照组(P=0.020),高于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.000,P=0.000);细胞凋亡率高于空白对照组(P=0.000),低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.000,P=0.000)。NEAT1抑制组RAW264.7巨噬细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均高于空白对照组(P=0.020,P=0.010,P=0.000),低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.011,P=0.019,P=0.015;P=0.016,P=0.004,P=0.002);IL-1β、IL-6、TNF-α、NLRP3、caspase-1的蛋白相对表达量均高于空白对照组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000),低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.035,P=0.011,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.001,P=0.033,P=0.004,P=0.017);NF-κB磷酸化水平高于空白对照组(P=0.000),低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.003,P=0.013)。(3)抑制miRNA-142a-5p表达对沉默NEAT1的RAW264.7巨噬细胞炎症反应影响的检测结果。NEAT1抑制联合miRNA-142a-5p抑制组RAW264.7巨噬细胞的细胞活力与细胞中miRNA-142a-5p的相对表达水平均低于NEAT1抑制组和NEAT1抑制联合miRNA抑制阴性对照组(P=0.000,P=0.000;P=0.001,P=0.000);细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均高于NEAT1抑制组和NEAT1抑制联合miRNA抑制阴性对照组(P=0.013,P=0.032,P=0.004;P=0.006,P=0.001,P=0.002),低于模型组(P=0.036,P=0.006,P=0.013);与NEAT1抑制阴性对照组相比,该组RAW264.7巨噬细胞中的IL-6含量低(P=0.020)。NEAT1抑制联合miRNA-142a-5p抑制组RAW264.7巨噬细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、NLRP3、caspase-1的蛋白相对表达量均高于NEAT1抑制组和NEAT1抑制联合miRNA抑制阴性对照组(P=0.001,P=0.000,P=0.008,P=0.001,P=0.000;P=0.005,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.046),低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.001,P=0.006,P=0.000,P=0.003,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);NF-κB磷酸化水平高于NEAT1抑制组和NEAT1抑制联合miRNA抑制阴性对照组(P=0.020,P=0.038),低于模型组和NEAT1抑制阴性对照组(P=0.000,P=0.000)。(4)NEAT1与miRNA-142a-5p靶向结合关系验证结果。NEAT1野生型miRNA-142a-5p抑制组相对萤光素酶活性高于NEAT1野生型miRNA抑制阴性对照组(P=0.025)。NEAT1突变型miRNA-142a-5p抑制组与NEAT1突变型miRNA抑制阴性对照组的相对萤光素酶活性比较,差异无统计学意义(P=0.486);NEAT1野生型miRNA抑制阴性对照组与NEAT1突变型miRNA抑制阴性对照组的相对萤光素酶活性比较,差异无统计学意义(P=0.780)。结论:NEAT1可介导RAW264.7巨噬细胞炎症反应,参与RAW264.7巨噬细胞的炎症损伤过程,与miRNA-142a-5p有靶向结合关系;抑制NEAT1的表达能够促进miRNA-142a-5p的表达,进而抑制炎症相关蛋白的表达;NEAT1-miRNA-142a-5p轴对尿酸钠诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应具有调控作用。 展开更多
关键词 关节炎 痛风性 RNA 长链非编码 微RNAs RAW264.7细胞 炎症 模型 生物学 实验研究
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猪皮胶原肽对RAW264.7细胞的免疫调节作用 认领 引用
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作者 孙卓 张松 +4 位作者 苏乐 岳秋林 孙欣 李昆仑 赵林 《齐鲁工业大学学报》 CAS 2026年第3期1-9,共9页
为探究猪皮胶原肽对RAW264.7细胞的免疫调节作用,本研究通过酶解制备猪皮胶原肽,并对其氨基酸组成及分子量分布进行分析。采用MTT法、中性红吞噬实验、细胞形态学观察、细胞因子含量测定以及实时荧光定量PCR等方法,系统评估猪皮胶原肽对... 为探究猪皮胶原肽对RAW264.7细胞的免疫调节作用,本研究通过酶解制备猪皮胶原肽,并对其氨基酸组成及分子量分布进行分析。采用MTT法、中性红吞噬实验、细胞形态学观察、细胞因子含量测定以及实时荧光定量PCR等方法,系统评估猪皮胶原肽对RAW264.7细胞增殖活性、吞噬功能、细胞形态变化、NO、TNF-α、IL-2和IL-12生成水平以及相关免疫因子基因(iNOS、TNF-α、IL-2和IL-12)mRNA表达的影响。结果表明,猪皮胶原肽主要由甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸和精氨酸组成,分子量主要在500~5000 Da之间,可显著促进RAW264.7细胞的增殖和吞噬能力,改变细胞形态,促进NO、TNF-α、IL-2和IL-12的生成,并上调iNOS、TNF-α、IL-2和IL-12的基因表达。综上所述,猪皮胶原肽具有激活巨噬细胞、增强机体非特异性免疫功能的潜力。 展开更多
关键词 猪皮胶原肽 RAW264.7细胞 酶解 免疫调节作用 氨基酸组成
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