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花生抗旱基因AhCPK8及其互作蛋白GAPDH的克隆及分子鉴定 认领 引用 被引量：1
1
作者 何梅 张佳蕾 +6 位作者 范士凯 孟静静 王建国 郭峰 李新国 万书波 杨莎 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2025年第10期2713-2726,共14页
花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料和经济作物,干旱是限制花生产量的主要因素之一。探明花生响应干旱胁迫的关键基因,对后续花生品种改良,提高产量具有重要意义。本研究以花生品种花育22号(HY22)为研究对象,足钙(SC)、缺钙(NC)2种... 花生(Arachis hypogaea L.)是重要的油料和经济作物,干旱是限制花生产量的主要因素之一。探明花生响应干旱胁迫的关键基因,对后续花生品种改良,提高产量具有重要意义。本研究以花生品种花育22号(HY22)为研究对象,足钙(SC)、缺钙(NC)2种营养液水培培养,终浓度为20%PEG-6000溶液模拟干旱胁迫处理(DSC、DNC)。通过干旱处理后转录组数据结合花生钙传感蛋白编码基因CPKs的差异表达筛选出花生抗旱基因AhCPK8。以干旱处理后的花生叶片为材料,利用酵母双杂交筛选到其互作蛋白甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)并得到初步验证。GAPDH家族基因在调节植物对非生物胁迫的反应中发挥着重要作用。基于AhGAPDH基因家族的生物信息学分析,在花生中共鉴定出21个GAPDH基因,再根据大豆和拟南芥系统发育树关系以及基因在12条染色体上的先后顺序进行命名。基本理化特征结果表明,AhGAPDH家族成员大多数为稳定、疏水性蛋白;同一聚类的AhGAPDH家族成员大多数表现出相似的motif结构、保守结构域和基因结构;启动子区域中有丰富的光响应、植物激素响应及非生物胁迫响应相关的顺式作用元件。AhCPK8与AhGAPDH存在相互作用,共同调控花生的抗旱性。 展开更多
关键词 花育22号 抗旱性 AhCPK8 互作蛋白 GAPDH
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表达副猪格拉瑟菌GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌构建及免疫学评价 认领 引用
2
作者 陈丽璇 符颖 +3 位作者 陈政权 李莉莉 张伟孝 张建民 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2025年第3期319-325,共7页
【目的】构建能同时表达副猪格拉瑟菌Glaesserella parasuis关键抗原GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌Salmonella choleraesuis,并评估其作为二联疫苗候选株的潜力,以期为预防G.parasuis和S.choleraesuis感染提供一种新型高效的解决方... 【目的】构建能同时表达副猪格拉瑟菌Glaesserella parasuis关键抗原GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌Salmonella choleraesuis,并评估其作为二联疫苗候选株的潜力,以期为预防G.parasuis和S.choleraesuis感染提供一种新型高效的解决方法。【方法】选取多种血清型的G.parasuis中广泛存在的抗原GAPDH和OmP26作为外源抗原,以S.choleraesuis C500Δasd缺失株为载体,构建同时表达GAPDH和OmP26的G.parasuis-S.choleraesuis重组菌株,并对其生物学特性和免疫效果展开研究。【结果】PCR与测序结果共同表明,本研究成功构建重组菌株C501(pYA-GAPDH-OmP26),该菌株能稳定携带GAPDH和OmP26基因片段(大小分别为1020和798 bp),在连续传代100次中均能稳定扩增目标片段;且生长曲线、生化特性与对照菌C501(pYA3493)一致。重组菌株C501(pYA-GAPDH-OmP26)对S.choleraesuis C78-1和G.parasuis 5型强毒株SH0165的保护率分别为62.5%和50.0%,而C501(pYA3493)对S.choleraesuis C78-1的保护率为50.0%,对G.parasuis 5型强毒株SH0165则无保护作用。【结论】重组沙门氏菌C501(pYA-GAPDH-OmP26)能稳定携带异源基因,具有与亲本菌株相近的生物学特性及良好的表达特性,能够诱导机体对G.parasuis和S.choleraesuis产生联合免疫反应,为G.parasuis-S.choleraesuis二联基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪 副猪格拉瑟菌 猪霍乱沙门氏菌 C500Δasd缺失株 GAPDH OmP26
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刺五加GAPDH基因的克隆及序列分析 认领 引用 被引量：25
3
作者 邢朝斌 吴鹏 +2 位作者 陈龙 梁能松 何闪 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期155-158,共4页
目的对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果克隆了长... 目的对刺五加Eleutherococcus senticosus GAPDH基因进行克隆及序列分析,使其成为可用的内参照基因。方法采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,运用RT-PCR法克隆GAPDH基因的部分序列,并以其为内参照基因进行半定量PCR。结果克隆了长度为627 bp的刺五加GAPDH基因,推测其编码209个氨基酸,与三七、人参、拟南芥的GAPDH氨基酸序列同源性分别为97%、93%、93%,核苷酸同源性分别为94%、86%、84%。其作为内参照基因的半定量PCR具有良好的扩增效果和重现性。结论首次分离并克隆了刺五加GAPDH cDNA,证实该序列可以作为基因表达分析的内参照基因,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机制研究奠定基础。 展开更多
关键词 刺五加 GAPDH基因 克隆 序列分析 内参照基因
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脊尾白虾GAPDH基因的克隆及其内参基因稳定性分析 认领 引用 被引量：10
4
作者 薛蓓 张培 +5 位作者 李志辉 赵莲 赖晓芳 高焕 李健 阎斌伦 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1003-1012,共10页
为比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S rRNA和β-actin基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)作内参基因的优劣,本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾GAPDH基因全长cDNA序列(Gen... 为比较甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、18S rRNA和β-actin基因在脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)作内参基因的优劣,本研究采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾GAPDH基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KX893516),通过实时荧光定量PCR(quantative real-time PCR,qPT-PCR)技术,检测3种基因在脊尾白虾不同组织及不同蜕壳后时间点的表达量变化,在此基础上进行内参稳定性分析。结果显示,脊尾白虾GAPDH基因全长1514 bp,开放读码框1002 bp,编码333个氨基酸,二级结构预测显示GAPDH蛋白具有一个高度保守的NAD^+结合功能域(NAD binding domain)和行使糖运输和代谢的催化功能域。分析qRT-PCR结果并结合ge Norm、Norm Finder和Best Keeper 3种软件的分析发现,在不同组织和不同蜕壳后时间点,3种内参基因的稳定性由高到低依次为18S r RNA、GAPDH、β-actin。因此,在脊尾白虾不同组织和不同蜕壳后时间点的定量分析中,选取单内参基因时,推荐使用18S rRNA为内参基因,双内参时推荐18S rRNA和GAPDH,而18S rRNA、β-actin和GAPDH在其他生理条件下作内参基因的稳定性还有待进一步研究。 展开更多
关键词 脊尾白虾 GAPDH 内参基因 组织 蜕壳后时间点
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三七植物GAPDH基因克隆及序列分析 认领 引用 被引量：27
5
作者 朱华 李珅 +1 位作者 赵瑞强 吴耀生 《西北植物学报》 CAS 北大核心 2006年第7期1316-1319,共4页
采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序... 采用改进的异硫氰酸胍法提取高质量三七总RNA,运用RT-PCR方法克隆了三七GAPDH基因的部分序列,长度为627 bp,编码209个氨基酸,为半定量RT-PCR以及Real-time RT-PCR等技术在三七植物研究中的应用提供了条件.氨基酸序列比对结果表明,该序列与拟南芥、烟草、人参的GAPDH氨基酸序列的同源性分别为91%、93%、95%;核苷酸序列的同源性分别为82%、84%、85%. 展开更多
关键词 三七 GAPDH基因 克隆
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杧果MGAPDH同源基因的克隆及其表达分析 认领 引用 被引量：11
6
作者 罗聪 何新华 +2 位作者 胡颖 谭超 欧世金 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,F0003,共6页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码401个氨基酸。利用分子生物学软件对MGAPDH蛋白进行生物信息学分析,结果显示:MGAPDH蛋白分子量为42.8 ku,等电点为8.9;该蛋白包含2个功能域,即NADB_Rossmannsuperfamily和Gp_dh_C superfamily;MGAPDH蛋白不含信号肽序列和跨膜结构,是非分泌蛋白,位于叶绿体中。氨基酸序列进化分析结果显示,杧果MGAPDH蛋白可能与光合作用有关。半定量分析显示,杧果MGAPDH同源基因在杧果不同组织中均表达,并且表达水平差异不明显,说明杧果MGAPDH同源基因可作为杧果基因差异表达的内参基因。 展开更多
关键词 杧果 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) 表达分析 序列分析
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Critical protein GAPDH and its regulatory mechanisms in cancer cells 认领 引用 被引量：17
7
作者 Jin-Ying Zhang Fan Zhang +5 位作者 Chao-Qun Hong Armando E.Giuliano Xiao-Jiang Cui Guang-Ji Zhou Guo-Jun Zhang Yu-Kun Cui 《Cancer Biology & Medicine》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期10-22,共13页
Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase （GAPDH）, initially identified as a glycolytic enzyme and considered as a housekeeping gene, is widely used as an internal control in experiments on proteins, mRNA, and DNA. H... Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase （GAPDH）, initially identified as a glycolytic enzyme and considered as a housekeeping gene, is widely used as an internal control in experiments on proteins, mRNA, and DNA. However, emerging evidence indicates that GAPDH is implicated in diverse functions independent of its role in energy metabolism; the expression status of GAPDH is also deregulated in various cancer cells. One of the most common effects of GAPDH is its inconsistent role in the determination of cancer cell fate. Furthermore, studies have described GAPDH as a regulator of cell death; other studies have suggested that GAPDH participates in tumor progression and serves as a new therapeutic target. However, related regulatory mechanisms of its numerous cellular functions and deregulated expression levels remain unclear. GAPDH is tightly regulated at transcriptional and pnsttranscriptional levels, which are involved in the regulation of diverse GAPDH functions. Several cancer-related factors, such as insulin, hypoxia inducible factor-1 （HIF-1）, p53, nitric oxide （NO）, and acetylated histone, not only modulate GAPDH gene expression but also affect protein functions via common pathways. Moreover, posttranslational modifications （PTMs） occurring in GAPDH in cancer cells result in new activities unrelated to the original glycnlytic function of GAPDH. In this review, recent findings related to GAPDH transcriptional regulation and PTMs are summarized. Mechanisms and pathways involved in GAPDH regulation and its different roles in cancer cells are also described. 展开更多
关键词 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase （GAPDH） mechanism regulation posttranslational modification （PTM） cancer
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中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 认领 引用 被引量：6
8
作者 田月珍 黄锡霞 +8 位作者 狄江 田可川 吴伟伟 徐新明 哈尼克孜 付雪峰 张艳花 马依拉 艾买提 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1938-1943,共6页
【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR G... 【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法,为进一步研究中国美利奴羊(新疆型)相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊(新疆型)皮肤组织为试材,根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列,设计并合成一对引物,建立基于SYBR Green I染料技术的Real-Time PCR检测体系,绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值(Ct)与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系,GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数(X)与Ct值的关系为Ct=一3.679 51g/X+35.648,相关系数R=0.999 8;试验重复性好,批内和批间变异系数(CV%)分别为0.22%～3.45%和1.30%～4.89%。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点,GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。 展开更多
关键词 中国美利奴羊(新疆型) GAPDH基因 RT—PCR 内参基因
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家蝇GAPDH基因的克隆、表达及作为内参的可靠性分析 认领 引用 被引量：6
9
作者 胡红元 任春丽 +4 位作者 尚小丽 陈明明 王宇 王涛 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第3期250-256,共7页
目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能... 目的探讨家蝇甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因在不同饲料饲养、不同发育期及不同组织的转录和表达情况,评价其作为家蝇功能基因研究内参的稳定性。方法运用PCR技术扩增GAPDH基因完整编码序列,生物信息学方法预测该基因及其编码蛋白功能。构建pET-28a(+)-GAPDH重组质粒,转化到大肠埃希菌Transetta(DE3)中进行诱导表达,纯化重组蛋白制备多克隆抗体。运用Real-time PCR和Western blot检测家蝇不同发育期、三龄幼虫不同组织和不同饲养物处理下GAPDH基因的表达情况。结果家蝇GAPDH基因ORF全长999bp,编码332个氨基酸,理论分子质量37.3ku,等电点为8.57,具有GAPDH家族的蛋白保守结构域;构建的重组质粒经PCR及测序鉴定正确;SDS-PAGE分析显示重组质粒在Transetta(DE3)中表达,纯化后的表达产物与目的蛋白大小相符,Western blot显示该蛋白可被相应血清识别;Real-time PCR分析GAPDH基因在不同饲料饲养3龄幼虫、不同发育期均保持较好的转录稳定性,同时,Western blot分析GAPDH分子在家蝇不同发育期及3龄幼虫不同组织中均有表达,且表达量无明显差别。结论 GAPDH基因在不同发育期、不同组织及不同饲养物饲养的家蝇表达稳定,可作为家蝇可靠性内参基因使用。 展开更多
关键词 家蝇 GAPDH基因 克隆表达 内参基因
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重组人红细胞生成素通过抑制GAPDH核内过表达减少脑缺血大鼠神经元凋亡 认领 引用 被引量：5
10
作者 关艳中 郭冉 +1 位作者 念红 金秀东 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期269-274,共6页
本文旨在探讨重组人红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)是否通过抑制甘油醛三磷酸脱氢酶(glyc-eraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)核内过表达减少脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡。大脑中动脉栓塞法制作脑... 本文旨在探讨重组人红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)是否通过抑制甘油醛三磷酸脱氢酶(glyc-eraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)核内过表达减少脑缺血再灌注大鼠神经元凋亡。大脑中动脉栓塞法制作脑缺血再灌注大鼠模型。48只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组和EPO处理组。TTC染色、尼氏染色及Hoechst-33258免疫荧光分别观察EPO对脑组织缺血和缺血半影区神经元凋亡的影响;Hoechst-33258和GAPDH免疫荧光双染观察EPO对GAPDH核内过表达的影响。结果显示,与生理盐水对照组相比,再灌注同时开始给予rhEPO (3 000 U/kg,3次/日,腹腔注射)显著抑制缺血再灌注引起的神经元GAPDH核内过表达,同时显著减少半影区神经元凋亡数目,减轻缺血性脑损伤。以上结果提示,rhEPO可能通过抑制GAPDH核内过表达减少脑缺血再灌注大鼠半影区神经元凋亡,为探讨EPO的神经保护机制提供了实验证据。 展开更多
关键词 促红细胞生成素 GAPDH 脑缺血 神经元凋亡
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鸭GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 认领 引用 被引量：11
11
作者 杨发龙 岳华 +1 位作者 谢秀兰 贾文祥 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期92-95,共4页
本研究旨在建立鸭GAPDH基因的real-time PCR技术,为鸭功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中鸭GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的real-time PCR方法.结果表明,所建立的方法具有快速、... 本研究旨在建立鸭GAPDH基因的real-time PCR技术,为鸭功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中鸭GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的real-time PCR方法.结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点.研究结果为鸭GAPDH作为内参基因用于鸭相关基因定量表达分析奠定了基础. 展开更多
关键词 鸭 GAPDH基因 real-timePCR 内参基因
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金黄色葡萄球菌重组GapC蛋白的GAPDH活性及免疫原性分析 认领 引用 被引量：9
12
作者 朱洪伟 朱战波 +3 位作者 崔玉东 张晶 刘乐锋 朴范泽 《生物工程学报》 CAS 北大核心 2008年第5期754-759,共6页
为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用,应用PCR方法扩增出S.aureus的gapC基因,插入到pQE-30载体相应位点,构建重组质粒pQE/gapC。将其导入宿主菌E.coliM15(pREP4)后,IPTG诱导... 为研究金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)表面GapC蛋白的GAPDH活性、免疫原性及免疫保护作用,应用PCR方法扩增出S.aureus的gapC基因,插入到pQE-30载体相应位点,构建重组质粒pQE/gapC。将其导入宿主菌E.coliM15(pREP4)后,IPTG诱导表达。重组蛋白纯化后进行GAPDH活性检测,并与灭活全菌体分别免疫健康家兔。然后,应用ELISA方法检测血清中IgG抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子浓度,并用1.0×108CFU/mLS.aureus菌株Wood46对免疫家兔攻毒。SDS-PAGE结果显示,GapC蛋白在E.coliM15(pREP4)中获得表达;经GAPDH活性检测及WesternBlot检测,重组蛋白具有较高的GAPDH活性和抗原特异性;经ELISA检测,GapC蛋白及全菌体组兔血清中IgG抗体水平迅速升高,并在加强免疫后第28天达到最高(1:64000),加强免疫后第14d,血清中细胞因子IFN-γ和IL-4浓度与对照组相比,显著升高(P0.05);攻毒结果为蛋白免疫组家兔获得一定的免疫保护(4/5)。以上结果表明,表达的重组GapC蛋白具有GAPDH活性、较好的免疫原性及免疫保护力,可作为深入研究S.aureus基因工程疫苗的良好靶向。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 GapC蛋白 GAPDH活性 免疫原性 免疫保护
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食蚊鱼(Gambusia afinis)cat、gapdh和gst基因的克隆及其在生态毒理学中的应用 认领 引用 被引量：7
13
作者 欧瑞康 武小燕 +4 位作者 库培佳 王兰 苏甜 梁惜梅 聂湘平 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期83-92,共10页
根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst... 根据Ensembl、Genbank登录的鱼类cat、gapdh和gst基因的CDS序列设计普通PCR扩增引物,寻找食蚊鱼的cat、gapdh和gst基因的c DNA片段,并根据定量引物设计要求设计出相应的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR引物,建立了食蚊鱼cat、gapdh和gst基因的SYBR Green I荧光定量RT-q PCR方法。该方法在104~108数量级范围内有良好线性关系(R=0.999~1.000);熔解曲线显示扩增产物特异性良好,均为单一峰值;质粒标准品最高浓度与最低浓度的批内试验变异系数与批间试验变异系数均低于2%。利用该方法监测和评价环境污染物对水生生物的影响,选择了水体中常见典型药物污染物——双氯芬酸,研究其对食蚊鱼抗氧化基因表达的影响。结果表明,雌性食蚊鱼暴露在不同浓度双氯芬酸钠(0.005、0.05、0.5和5 mg·L-1)24 h后,其肝脏cat、gapdh和gst的mRNA呈现显著变化,相对于对照组,在低浓度0.005 mg·L-1时,cat与gst mRNA的表达量均有极显著上升(p<0.01),而其它浓度均极显著下降(p<0.01)。试验表明该方法具有快速、精确、灵敏度高的优点,可为利用该类小型鱼类的原位污染物的生物监测和生态毒理评价提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 食蚊鱼 cat gapdh gst 实时荧光定量PCR 双氯芬酸
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文心兰GAPDH基因片段的克隆及序列分析 认领 引用 被引量：4
14
作者 张国付 蒋素华 +3 位作者 崔波 袁秀云 田云芳 叶永忠 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期68-71,共4页
采用Trizol法提取文心兰花期花葶总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了文心兰GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因的2个部分序列,长度均为875 bp,编码291个氨基酸残基.序列分析结果表明,与其它已登录物种的GAPDH基因相比,其核苷酸序列的同源性均在79... 采用Trizol法提取文心兰花期花葶总RNA,并运用RT-PCR方法克隆了文心兰GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)基因的2个部分序列,长度均为875 bp,编码291个氨基酸残基.序列分析结果表明,与其它已登录物种的GAPDH基因相比,其核苷酸序列的同源性均在79%以上,与蕙兰(JN177724.1)同源性高达到92%,氨基酸序列的同源性也在85%以上;且与单子叶植物的同源序列表现出较高的相似性.本研究已克隆出文心兰GAPDH基因的部分cDNA同源序列片段,分别命名为OnGA1和OnGA2,并在GenBank注册,登录号分别为JN981141和JN981142. 展开更多
关键词 文心兰 GAPDH基因 克隆
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赤桉GAPDH家族基因的克隆及其序列分析 认领 引用 被引量：3
15
作者 陈鸿鹏 朱凤云 +1 位作者 吴志华 谢耀坚 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2014年第1期120-127,共8页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）是高等植物糖酵解和糖异生反应中的关键酶，是维持生命活动能量形成的最基本酶之一，它氧化甘油醛-3-磷酸生成1，3-二磷酸甘油酸，由此为糖酵解过程提供产生ATP的底物[1-4]。此外，由于该酶基因为管家基因... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）是高等植物糖酵解和糖异生反应中的关键酶，是维持生命活动能量形成的最基本酶之一，它氧化甘油醛-3-磷酸生成1，3-二磷酸甘油酸，由此为糖酵解过程提供产生ATP的底物[1-4]。此外，由于该酶基因为管家基因，几乎在所有组织中都高水平表达，在同种细胞或组织中的蛋白质表达量较为恒定，故被广泛用作实时荧光定量PCR的内参基因[5-9]。近年来，随着研究的不断深入，发现GAPDH还参与胚胎的特化、细胞融合、微管结束、磷酸转移酶激活、DNA复制与修复等过程，并调控组蛋白基因的表达、调节端粒结构，具有核膜融合和微管成束的活性[10-14]。同时，GAPDH的mRNA和蛋白质水平会受到各种环境因素的影响，并具有不同的亚细胞定位以及多元化的生理功能[15-16]。 展开更多
关键词 赤桉 GAPDH 家族基因 克隆 序列分析
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GAPDH功能多样性 认领 引用 被引量：21
16
作者 尚海旭 井然 +1 位作者 贾弘禔 倪菊华 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期371-374,共4页
3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上... 3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上均有定位。如在细胞核内,GAPDH参与tRNA出核、mRNA稳定性调节、DNA损伤修复、组蛋白转录调控、凋亡及神经退行性疾病发生等。在细胞质中,GAPDH有磷酸激酶活性、催化微管聚合的功能及参与细胞保护。在生物膜上,GAP-DH可促进膜融合、参与膜转运等。 展开更多
关键词 3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) 功能多样性
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实时荧光PCR检测鸡GAPDH基因方法的建立 认领 引用 被引量：8
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作者 李娅 韦平 +5 位作者 金元昌 韦信贤 杨先荣 牛搏学 梁韦芬 苏清康 《中国家禽》 北大核心 2008年第8期37-40,共4页
根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehy-drogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了荧光定量PCR法。采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量... 根据GenBank上鸡的3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehy-drogenase,GAPDH)基因的序列,在保守区域设计并合成一对引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了荧光定量PCR法。采用梯度浓度的GAPDH基因重组标准品质粒DNA进行荧光定量PCR并建立了标准曲线,经分析显示标准曲线的Ct值与标准品浓度的对数值之间存在良好的线性关系;动力学曲线分析表明,在本研究所建立的反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度都达到10拷贝/反应。实时荧光定量PCR检测GAPDH基因表达水平标准品质粒和标准曲线的建立,为GAPDH基因作为内参基因进行鸡功能基因与病原基因表达的定量分析奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡 GAPDH基因 实时荧光定量PCR 内参基因
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刺五加GAPDH基因全长cDNA的克隆与生物信息学分析 认领 引用 被引量：3
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作者 修乐山 柴丽花 +1 位作者 周秘 邢朝斌 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期124-127,共4页
采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能。研究结果表明,刺五加GAPGH基因的cDNA全... 采用cDNA末端RACE技术,从刺五加叶片中克隆到GAPDH基因cDNA的全长序列,并运用生物信息学方法对该基因的cDNA序列、保守区、氨基酸序列、亲缘关系等特征进行分析,并预测其编码蛋白质的结构和功能。研究结果表明,刺五加GAPGH基因的cDNA全长为1 437 bp,开放阅读框全长为1 023 bp,编码一个具有340个氨基酸残基的蛋白,蛋白分子质量为37.070 ku,理论等电点(pI)为7.71。刺五加GAPDH蛋白不存在跨膜结构域,定位于细胞质中,属于亲水蛋白。 展开更多
关键词 刺五加 GAPDH 克隆
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太子参GAPDH基因的克隆及序列分析 认领 引用 被引量：2
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作者 龙登凯 丁铃 +3 位作者 李军 周涛 江维克 肖承鸿 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第7期87-92,共6页
为了获取可靠内参基因,采用同源克隆技术和c DNA末端快速延伸技术,首次从太子参中克隆3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)的部分c DNA序列,命名为Ph GAPDH,序列长度为981 bp,包含699 bp的部分阅读框,推测其编码232个氨基酸,还含有282 bp的3&... 为了获取可靠内参基因,采用同源克隆技术和c DNA末端快速延伸技术,首次从太子参中克隆3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)的部分c DNA序列,命名为Ph GAPDH,序列长度为981 bp,包含699 bp的部分阅读框,推测其编码232个氨基酸,还含有282 bp的3'UTR。序列分析结果表明,太子参Ph GAPDH基因编码的氨基酸序列与同科植物香石竹(Dianthus caryophyllus)氨基酸序列同源性高达99%。PCR分析结果表明,Ph GAPDH基因在太子参不同种源块根、同一种源不同组织及不同生长时期的表达水平较稳定,可以作为太子参功能基因研究的内部参考基因。 展开更多
关键词 太子参 GAPDH基因 同源克隆法 cDNA末端快速扩增 表达模式
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Taqman荧光定量PCR是核酸水平对管家基因GAPDH进行定量的好方法 认领 引用 被引量：4
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作者 王萍 丛敏 +5 位作者 李忆梅 唐淑珍 刘晓明 王宝恩 贾继东 尤红 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第2期210-213,共4页
目的 比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛（GAPDH）标准曲线的检出下限、线性范围的差异，确定一种较好的GAPDH绝对定量方法。方法 构建含GAPDH全长的质粒，经PCR和EcoRⅠ限制性酶切鉴定... 目的 比较Taqman荧光定量PCR法、SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法制作3-磷酸甘油醛（GAPDH）标准曲线的检出下限、线性范围的差异，确定一种较好的GAPDH绝对定量方法。方法 构建含GAPDH全长的质粒，经PCR和EcoRⅠ限制性酶切鉴定确认后，紫外定量并连续稀释10倍作为标准品。分别用Taqman法和SYBR GreenⅠ法于荧光定量PCR仪上制作标准曲线，同时用普通PCR结合琼脂糖凝胶电泳利用Quantity One软件定量并制作标准曲线。结果 Taqman法检出GAPDH的下限为2．0×10^4拷贝，线性范围：2．0×10^4～2．0×10^10拷贝；SYBR GreenⅠ法检出GAPDH的下限为2．0×10^7拷贝，线性范围：2．0×10^7～2．0×10^10拷贝；普通PCR检出GAPDH的下限为2．0×10^6拷贝，线性范围：2．0×10^7～2．0×10^9拷贝。结论 Taqman荧光定量PCR法比SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法和普通PCR法的灵敏度高，线性范围宽，是核酸水平对GAPDH定量的好方法。 展开更多
关键词 PCR GAPDH 荧光定量
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